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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 外植体的灭菌
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hanyu9217

木虫 (正式写手)

[交流] 外植体的灭菌

小弟现在在做一个试验，想得到一批无菌植株，材料是银中杨（一种杨树）的茎短,茎短上有笌蕾，灭菌的时候不方便（灭菌液是酒精和升汞），时间长了，外植体死了，时间短了，灭菌不彻底啊，想问一下，有没有什么好方法对付笌蕾啊 ！谢谢了啊
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1楼 2008-06-07 18:52:32
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wolong1984

银虫 (小有名气)
目前还没听说其他方法，要不你做个时间的梯度，看能不能搞定！
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2楼2008-06-08 21:22:41
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realNazi

木虫 (正式写手)
外植体灭菌就是很麻烦的
建议你先用流水冲洗1－2小时
再用3％次氯酸钠预处理（具体时间把握在10－15min）
之后拿到超净工作台用无菌水清洗3到5次每次5分钟
之后用75％酒精处理30s，之后用无菌水清洗数次
再用1％的升汞浸泡5－15分钟（具体时间要做梯度实验找出最优组合）
实验是很简单就是时间费的比较多
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学为人师，行为示范
3楼2008-06-09 00:36:14
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xiaochong0101

铜虫 (小有名气)
木本植物外植体的处理很麻烦，取材很重要！要取新发出的嫩芽，本身带菌少。
如果是冬季或早春没有萌发时取材，建议取整段枝条，冲洗干净（先用洗涤剂洗，要流水多冲），如果上述方法都不行，建议简单消毒处理后，插到无菌三角瓶，加入无菌水，光下培养，使芽萌发，每天换水。待芽萌发后，取嫩芽表面消毒后培养。
对你说的材料不太了解，不知道是不是适用。
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4楼2008-06-11 15:48:04
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
换一种消毒试剂试试，用次氯酸钠再加上一定浓度的吐温20（表面活化剂）
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
5楼2008-06-11 18:32:41
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