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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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logowang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 木欣欣60 at 2015-01-28 10:06:20
嗯,前辈说的对,1.我现在正把我的载体质粒送去测序,测35s启动子到我需要的酶切位点之间的片段。确保载体无错。2.我之前也用载体的35s启动子和我的目的条带下游引物做的菌p,我以为是自己把两者的退火温度没选好所 ...

挑阳性克隆一般会要求跨插入片段进行扩增检测,这样能看出插入与否并且还可以判断插入方向(单酶切), 如果单纯的是用目的基因阔增,会出现问题,尤其是转化产物涂板的时候,菌液里含有高量的连接产物dna,很容易会造成平板上挑斑时候的假阳性。需要特别小心。
11楼2015-01-28 18:56:00
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般是体系污染,或者是你们实验是这段时间经常污染,应该是水或者电泳污染
12楼2015-01-28 21:24:25
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木欣欣60

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by logowang at 2015-01-28 18:56:00
挑阳性克隆一般会要求跨插入片段进行扩增检测,这样能看出插入与否并且还可以判断插入方向(单酶切), 如果单纯的是用目的基因阔增,会出现问题,尤其是转化产物涂板的时候,菌液里含有高量的连接产物dna,很容易 ...

对,我之前就意思到这个问题,但我们实验室一般用目的片段的上下游去菌p,然后出现预期的片段长度就送去测序了。(可能在这一环节就得送很多样品包括假阳性的了),若能测出自己需要的片段,也是个概率问题。
顺顺利利做实验,高高兴兴搞科研,幸幸福福地毕业。
13楼2015-01-29 09:48:34
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13227213581

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可能是 你所用菌株的基因组里面 含有你的目的基因  我遇到过这个情况
justbesunshine
14楼2015-01-31 16:51:46
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