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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 请教一个western blot的问题，急需答案，谢谢！！！！
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waterrainbow

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转膜时间延长至1.5小时，和显色底物时间延长至5min，增加曝光时间
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Alwaysbegrateful...
11楼2015-01-26 21:34:30
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lianchen1218

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品的问题是首先需要排除的，样品的处理很重要。然后就是封闭时间，我一般是5%牛奶一个小时室温封闭，然后二抗浓度可以适当提高，曝光时间太短了，最后一张图片看是有条带的，只是条带不均匀，摇床孵育的时候要保证膜都被液体覆盖了。最好在同张膜做个阳性对照就知道是没有表达还是表达过低了。
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勇敢一点，去充实自己
12楼2015-01-26 22:50:39
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allegory

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
13楼2015-01-26 23:09:12
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wqqqd2008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是转膜问题，湿转试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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14楼2015-01-26 23:17:53
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好纠结

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by huagnshaowu at 2015-01-26 19:25:46
15V，30min转膜？你确定转的过去？

过不去吗，内参我们也才转35min，做出来的结果很好啊
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15楼2015-01-27 09:03:38
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zhanghuaning

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
主要还是两个 问题 做 western出现这种结果 大多就是 两种：一是 一抗的问题  或者特异性不强或者浓度不够或者孵育过程没结合上，总之是一抗结合哟问题；二是 目的蛋白浓度太低或者失活了，提蛋白步骤有问题的可能性更大。
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为了找一本风水的书才注册的
16楼2015-01-27 10:16:40
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好纠结

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by zhanghuaning at 2015-01-27 10:16:40
主要还是两个 问题 做 western出现这种结果 大多就是 两种：一是 一抗的问题  或者特异性不强或者浓度不够或者孵育过程没结合上，总之是一抗结合哟问题；二是 目的蛋白浓度太低或者失活了，提蛋白步骤有问题的可能性 ...

蛋白应该没有问题，先做的内参，内参直接就出来了，紧接着就是做的目的蛋白，就是这种结果。一抗四度过夜结果也没好，买的是多抗，增加浓度的话改成1:500或者或者1:200，是这个意思吗
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17楼2015-01-27 10:43:45
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萧瑶cindy17

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你蛋白上样量是多少？  磷酸化的蛋白？
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18楼2015-01-28 17:06:20
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梦难春花开

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提高一抗浓度1:500，提高二抗浓度1:2000
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19楼2015-01-28 17:22:13
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qingli513

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
20楼2015-01-28 17:34:03
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