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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 筛选阳性克隆
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yuman0709

铁虫 (初入文坛)

[求助] 筛选阳性克隆 已有8人参与

利用菌落PCR进行阳筛，为什么筛不出来？一直没有条带。。。求答疑和建议
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1楼 2015-01-23 21:36:27
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yuman0709

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 夏菡小屋 at 2015-01-25 08:27:02
建议挑几个菌提个质粒验证一下。感觉连接有问题。

好的，又重新做了转化，如果再挑不出来阳性克隆就提质粒酶切，觉得提质粒比较浪费，所以一直是菌落PCR
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12楼2015-01-25 14:25:35
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稻稻

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yuman0709(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-24 20:47:17
确定引物和反应条件都没问题吗？如果是，那就说明长出的菌斑是假阳性。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
2楼2015-01-23 23:56:32
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huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你需要把你的实验详细介绍一下，你这样太笼统，我们看不出你采用什么引物？蓝白斑结果？PCR条件？等
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3楼2015-01-24 13:37:28
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yuman0709(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-25 18:20:44
有可能是空克隆或者说你做一下阳性对照
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4楼2015-01-24 14:57:59
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