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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紧急求助：克隆蓝白斑实验出现假阳性！！！
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glenn_007

木虫 (小有名气)

[交流] 紧急求助：克隆蓝白斑实验出现假阳性！！！

各位大侠，请帮帮忙，我先遇到一些奇怪的现象，不知如何改进：

    我的目标片段是600—700bp，T载体链接后，转化克隆，然后蓝白斑实验筛选。挑出白色colony，摇菌，最后制备质粒。
    但是送去测序的样片却显示全部是载体序列。重复了很多次，也都是这样的结果，我现在制备质粒之前，直接做PCR，结果显示也没有目标片段的扩增。这与测序的结果一致，证明里面并没有插入片段。但是蓝白斑实验明明是有白色的colony啊，虽然少了一点，但是与蓝斑对比，确实是白色的很明显。
   
    我不知道是哪里出了问题。请大家帮帮我？
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1楼 2008-06-05 09:42:14
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glenn_007

木虫 (小有名气)
谢谢大家的支持。
现在我已经找到原因了，是载体的问题，由于我之前用的载体是Lab内自己配置的，所以不是太好，白斑非常少不说，而且大部分都是假的，借了另一个实验室的从试剂公司买来的载体以后，效果非常好～现在我的实验已经可以进行下去了。
再次感谢大家的回帖！

请版主帮忙扣除我的金币，奖励给2楼humants，7楼的hulqi，8楼的xclj369ouc各一个。
谢谢大家！
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9楼2008-06-23 11:53:04
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humants

金虫 (正式写手)
有可能使载体自连太严重了，
你的T载体是不是很长时间了？你做一个T载体自连实验，看一下，是不是自连率很高！如果是建议换一批T载体，
如果是新载体，自连很厉害，你可以找试剂公司让他给你换一批！

祝你好运1
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2楼2008-06-05 11:12:33
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glenn_007

木虫 (小有名气)
我现在也怀疑是载体的原因，我用的载体是实验室自己配置的。刚用别人试剂盒的载体拿来试验一下。

但我还是很奇怪如果是载体自连的话，也应该是蓝斑，不应该是白斑吧。
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3楼2008-06-05 11:40:13
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
晕,提了质粒不做酶切和PCR鉴定就直接测么,太浪费了吧,呵
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4楼2008-06-05 11:41:05
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