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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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蓝冰1778

[交流] 求助:细胞培养中的酶消化问题

我在培养293细胞的过程中,用酶消化时,总是消化的不均匀,细胞较多呈球状,不知道问题出在哪里,请各位高手指导一下!!
消化时间5分钟,中间不住振荡。用的国产酶。
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taotao4108

金虫 (正式写手)

无理

细胞消化下来当然是球状了
不知道楼主所说的不均匀是什么意思,是消化的不彻底还是?
2楼2008-06-04 22:35:22
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weiwei1

木虫 (小有名气)

大概是酶量过大了,覆盖细胞即可,不要加太多。多了,细胞容易成片脱落。
3楼2008-06-05 08:32:48
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andia

木虫 (著名写手)

消化细胞加了胰酶之后
需要稍微晃动培养瓶(皿),使胰酶分布均匀,覆盖到底面所有地方;
需要放在37度培养箱中培育五分钟左右,这是胰酶发挥作用的最佳温度;
消化结束后需要轻轻拍打,使细胞脱落下来;
被消化下来的细胞应该是呈现圆形的.
4楼2008-06-05 08:50:16
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shji03zhangjing

铜虫 (小有名气)

加入酶以后需要稍微晃动培养瓶(皿),使胰酶分布均匀,覆盖到底面所有地方,之后就不要再振荡了,消化过程中不停的振荡就是会消化不均匀的啊,细胞消化后就是球形的。我养的肝癌细胞,胰酶不用温育(感觉水浴锅会增加污染的几率,一般都不用),也只需要消化一分钟后倒去酶液,再用剩余的酶消化二十秒左右 就能分散的很好了。比较难消化的细胞,也只是延长残酶消化的时间,分散的 也很好。
5楼2008-06-05 20:08:23
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蓝冰1778

我的细胞消化下来,即使当时看起来大部分是单个的,可是第二天细胞还是抱成团生长不知道怎末回事
6楼2008-06-12 00:01:44
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蓝冰1778

我还想再问一下啊,你们消化下来的细胞有多大比例是单个的啊,谢谢!!
7楼2008-06-12 00:06:09
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ECUST小熊

木虫 (正式写手)

消化下来之后用吸管使劲吹一吹
只要吹不死就可以了
8楼2008-06-18 23:58:12
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tanghongmin

新虫 (初入文坛)

细胞消化时,加入胰酶后,轻轻振荡,使细胞表面都接触到胰酶,然后静置约5min,静置时不要振荡细胞瓶,这样细胞常会成片脱落,看到的就是一团细胞呈圆形了。
   至于第二天细胞抱成团生长,原因可能有细胞传代密度较大,细胞稀释时没有分散的很均匀。
9楼2008-07-17 17:10:52
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后皇嘉树

金虫 (正式写手)

只要消化下来就可以阿,反正还要再离心,重新吹散后接种的嘛
看花开花落,心依旧。
10楼2008-07-21 08:53:27
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