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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：细胞培养中的酶消化问题
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蓝冰1778

[交流] 求助：细胞培养中的酶消化问题

我在培养293细胞的过程中，用酶消化时，总是消化的不均匀，细胞较多呈球状，不知道问题出在哪里，请各位高手指导一下！！
消化时间5分钟，中间不住振荡。用的国产酶。
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1楼 2008-06-04 16:24:31
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taotao4108

金虫 (正式写手)

无理
细胞消化下来当然是球状了
不知道楼主所说的不均匀是什么意思，是消化的不彻底还是？
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2楼2008-06-04 22:35:22
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weiwei1

木虫 (小有名气)
大概是酶量过大了,覆盖细胞即可,不要加太多。多了，细胞容易成片脱落。
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3楼2008-06-05 08:32:48
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andia

木虫 (著名写手)
消化细胞加了胰酶之后
需要稍微晃动培养瓶(皿),使胰酶分布均匀,覆盖到底面所有地方;
需要放在37度培养箱中培育五分钟左右,这是胰酶发挥作用的最佳温度;
消化结束后需要轻轻拍打,使细胞脱落下来;
被消化下来的细胞应该是呈现圆形的.
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4楼2008-06-05 08:50:16
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shji03zhangjing

铜虫 (小有名气)
加入酶以后需要稍微晃动培养瓶(皿),使胰酶分布均匀,覆盖到底面所有地方，之后就不要再振荡了，消化过程中不停的振荡就是会消化不均匀的啊，细胞消化后就是球形的。我养的肝癌细胞，胰酶不用温育（感觉水浴锅会增加污染的几率，一般都不用），也只需要消化一分钟后倒去酶液，再用剩余的酶消化二十秒左右 就能分散的很好了。比较难消化的细胞，也只是延长残酶消化的时间，分散的 也很好。
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5楼2008-06-05 20:08:23
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蓝冰1778

我的细胞消化下来，即使当时看起来大部分是单个的，可是第二天细胞还是抱成团生长不知道怎末回事
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6楼2008-06-12 00:01:44
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蓝冰1778

我还想再问一下啊，你们消化下来的细胞有多大比例是单个的啊，谢谢！！
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7楼2008-06-12 00:06:09
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ECUST小熊

木虫 (正式写手)
消化下来之后用吸管使劲吹一吹
只要吹不死就可以了
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8楼2008-06-18 23:58:12
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tanghongmin

新虫 (初入文坛)
细胞消化时，加入胰酶后，轻轻振荡，使细胞表面都接触到胰酶，然后静置约5min,静置时不要振荡细胞瓶，这样细胞常会成片脱落，看到的就是一团细胞呈圆形了。
   至于第二天细胞抱成团生长，原因可能有细胞传代密度较大，细胞稀释时没有分散的很均匀。
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9楼2008-07-17 17:10:52
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后皇嘉树

金虫 (正式写手)
只要消化下来就可以阿，反正还要再离心，重新吹散后接种的嘛
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看花开花落，心依旧。
10楼2008-07-21 08:53:27
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