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byebyey

[交流] 如何选择ELISA方法

我的抗原分子量26.8KD,应该是属于大分子量的,是不是只能选择双抗体夹心ELISA方法啊?
    如何用双抗体夹心,那就会有两个抗体,我的自己制备的单抗与载体吸附,那二抗用什么?怎么与抗原的不用位点结合啊?
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):呵呵,谢谢。
楼主这个问题曾经遇到过
一抗与二抗来源于同一物种,当加入HRP标记的三抗时,很可能无法体现出抗原的浓度变化,因为三抗对一抗与二抗会无差别的结合,此时显色深浅几乎与抗原无关

建议:一抗与二抗使用不同物种来源
楼主已经有单抗(鼠),可以自己制备些蛋白免疫家兔,制备兔多抗作为ELISA的二抗,使用HRP标记的抗兔IgG为三抗

祝楼主实验顺利
5楼2008-08-08 16:14:43
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bbcaaa888

铁虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
我觉的也可以用间接法;

如果用双抗体夹心法,第二个抗体可以用多抗,这样保证你的抗原会被结合,多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
2楼2008-07-12 08:24:45
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xueqiao1868

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢提供思路
看你对数据的要求!
非常准确:最好采用国外商品化试剂盒
双抗体夹心方法: 单抗-抗原-单抗-二抗-显色(封闭没写)
要求不高的话,直接包被抗原-单抗-二抗-显色
3楼2008-07-16 15:34:57
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xueqiao1868

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):ok,谢谢诶
看你对数据的要求!
非常准确:最好采用国外商品化试剂盒
双抗体夹心方法: 单抗-抗原-单抗-二抗-显色(封闭没写)
要求不高的话,直接包被抗原-单抗-二抗-显色
4楼2008-07-16 15:39:49
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