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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何选择ELISA方法
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byebyey

[交流] 如何选择ELISA方法

我的抗原分子量26.8KD，应该是属于大分子量的，是不是只能选择双抗体夹心ELISA方法啊？
    如何用双抗体夹心，那就会有两个抗体，我的自己制备的单抗与载体吸附，那二抗用什么？怎么与抗原的不用位点结合啊？
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1楼 2008-06-04 10:39:23
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bbcaaa888

铁虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
我觉的也可以用间接法；

如果用双抗体夹心法，第二个抗体可以用多抗，这样保证你的抗原会被结合，多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
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2楼2008-07-12 08:24:45
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xueqiao1868

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢提供思路
看你对数据的要求!
非常准确:最好采用国外商品化试剂盒
双抗体夹心方法: 单抗-抗原-单抗-二抗-显色(封闭没写)
要求不高的话,直接包被抗原-单抗-二抗-显色
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3楼2008-07-16 15:34:57
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xueqiao1868

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):ok，谢谢诶
看你对数据的要求!
非常准确:最好采用国外商品化试剂盒
双抗体夹心方法: 单抗-抗原-单抗-二抗-显色(封闭没写)
要求不高的话,直接包被抗原-单抗-二抗-显色
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4楼2008-07-16 15:39:49
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):呵呵，谢谢。
楼主这个问题曾经遇到过
一抗与二抗来源于同一物种，当加入HRP标记的三抗时，很可能无法体现出抗原的浓度变化，因为三抗对一抗与二抗会无差别的结合，此时显色深浅几乎与抗原无关

建议：一抗与二抗使用不同物种来源
楼主已经有单抗（鼠），可以自己制备些蛋白免疫家兔，制备兔多抗作为ELISA的二抗，使用HRP标记的抗兔IgG为三抗

祝楼主实验顺利
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5楼2008-08-08 16:14:43
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byebyey

非常感谢，我现在已经免好兔子和老鼠了！但是兔子的效价不是很高！用间接ELISA测多抗的效价应该可以吧！
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6楼2008-08-08 23:09:19
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+4,VIP+0):感谢答复，欢迎常来，积极交流
影响兔子的抗体效价的因素是多方面的

首先保证蛋白纯度及免疫量，纯度高自然制备的抗体效果好些，
免疫时注意与佐剂研磨充分形成油包水……（还有很多不列举）
当然你的蛋白如果是免疫原性很强（即有某些免疫优势表位那种），
就会很容易得到很高效价的抗体
在家兔实验中，自己的兔抗体以1：16000稀释结合时，
ELISA值全部OUT

间接ELISA测多抗的效价基本没有问题
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7楼2008-08-09 23:21:00
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