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yqxhjld

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[交流] DEAE-sephadex A-50 溶胀问题

最近需要用DEAE-sephadex A-50 纯化细菌全细胞粗酶液，买的是一家生物公司的DEAE-sephadex A-50 分装的，。回来溶胀，按照说明书，

1：用HEPES PH8.0 缓冲液100 度溶胀3小时，
2：HEPES PH8.0 缓冲液洗涤两次，
3：装柱，HEPES PH8.0 缓冲液平衡，
4：上样，HEPES PH8.0 缓冲液洗脱。
5: HEPES PH8.0 加Nacl 梯度洗脱。终浓度2mol/L

但是结果我的样品在HEPES PH8.0 缓冲液洗脱洗时，全部洗脱下来了，用HEPES PH8.0 加Nacl 梯度洗脱时，根本没有蛋白峰。也就是说蛋白根本没有挂上去。
以前用过别人的柱子，分离的效果挺好的，现在自己买胶做了两次都是这样的结果，不知道什么原因，是我溶胀得不好还是买的胶就不好。
做蛋白纯化我是刚做的，我们实验室也没什么人做过，所以也不清楚。
谁能告诉我why

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