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DEAE-sephadex A-50 溶胀问题
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最近需要用DEAE-sephadex A-50 纯化细菌全细胞粗酶液, 买的是一家生物公司的DEAE-sephadex A-50 分装的,。 回来溶胀,按照说明书, 1:用HEPES PH8.0 缓冲液100 度溶胀3小时, 2:HEPES PH8.0 缓冲液 洗涤两次, 3:装柱,HEPES PH8.0 缓冲液 平衡, 4:上样,HEPES PH8.0 缓冲液 洗脱。 5: HEPES PH8.0 加Nacl 梯度洗脱。终浓度2mol/L 但是结果我的样品在HEPES PH8.0 缓冲液 洗脱洗时,全部洗脱下来了,用HEPES PH8.0 加Nacl 梯度洗脱时,根本没有蛋白峰。也就是说蛋白根本没有挂上去。 以前用过别人的柱子,分离的效果挺好的,现在自己买胶做了两次都是这样的结果,不知道什么原因,是我溶胀得不好还是买的胶就不好。 做蛋白纯化我是刚做的,我们实验室也没什么人做过,所以也不清楚。 谁能告诉我why |
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2楼2008-06-09 23:15:01













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