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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 纯化的HIs标签融合蛋白低温放置出现絮状沉淀，求解？
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士
blessing
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蓝精灵
11楼2015-01-20 09:06:20
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liuyuchang06

至尊木虫 (文坛精英)

博士
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
mirongsheng: 金币+5 2015-01-20 13:53:24
很可能是蛋白本身的性质就不稳定
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12楼2015-01-20 09:06:31
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九字江山

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
mirongsheng: 金币+5 2015-01-20 13:48:10
你这蛋白放了多久啊。。。一般将目的蛋白提取出来，然后冻干保存或者-70度保存会比较好，蛋白冷藏很容易变性。建议先取一点样品，离心后上清沉淀（用buffer洗一下）分别电泳，确定一下沉淀是否是目的蛋白。将洗脱后的样品，最好透析到下一步要用的buffer里，浓缩后（蛋白浓度低易变性），再用0.22um的滤膜除菌后保存。
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13楼2015-01-20 10:36:20
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探花花

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
mirongsheng: 金币+5 2015-01-20 13:48:24
对  有可能是咪唑的影响  如果是咪唑的话 就得透析   也有可能是蛋白含量高 过饱和 出现沉淀了
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相信什么才会得到什么
14楼2015-01-20 10:43:11
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mirongsheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 九字江山 at 2015-01-20 10:36:20
你这蛋白放了多久啊。。。一般将目的蛋白提取出来，然后冻干保存或者-70度保存会比较好，蛋白冷藏很容易变性。建议先取一点样品，离心后上清沉淀（用buffer洗一下）分别电泳，确定一下沉淀是否是目的蛋白。将洗脱后 ...

纯化后是打算免疫用的，但是过夜保存就会出现沉淀，再测浓度，显著降低，就没办法用了，不是要长期保存的
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mi
15楼2015-01-20 13:46:19
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mirongsheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 探花花 at 2015-01-20 10:43:11
对  有可能是咪唑的影响  如果是咪唑的话 就得透析   也有可能是蛋白含量高 过饱和 出现沉淀了

谢谢！
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mi
16楼2015-01-20 13:51:56
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mirongsheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by liuyuchang06 at 2015-01-20 09:06:31
很可能是蛋白本身的性质就不稳定

如果是蛋白本身的问题，有没有好的建议，我的蛋白是酶类
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mi
17楼2015-01-20 13:53:15
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小小技术官

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by mirongsheng at 2015-01-20 08:41:23
谢谢！不知如何置换，是透析还是蛋白冻干以后加PBS溶解？...

用超滤管，或者过一遍分子筛就可以了
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生活是一面镜子，要笑着面对！
18楼2015-01-20 14:30:53
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mirongsheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 小小技术官 at 2015-01-20 14:30:53
用超滤管，或者过一遍分子筛就可以了...

谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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mi
19楼2015-01-20 22:55:50
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xiaochong8693

木虫之王 (文坛精英)
good luck!
blessing~~~~~~~~~~~~~
祝福楼主！
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20楼2015-01-20 23:32:01
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