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mirongsheng

木虫 (著名写手)

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[交流] 纯化的HIs标签融合蛋白低温放置出现絮状沉淀，求解？

我的目的蛋白，连接到pET28a载体上，进行表达，表达量还挺高，可溶性表达，但是过His柱纯化以后，低温放置一段时间就出现絮状沉淀，即使是放在4度，更甭提-20度了。不知各位有没有好的方法解决这个问题，不胜感激！

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1楼 2015-01-16 20:48:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

九字江山

银虫 (小有名气)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
mirongsheng: 金币+5 2015-01-20 13:48:10

你这蛋白放了多久啊。。。一般将目的蛋白提取出来，然后冻干保存或者-70度保存会比较好，蛋白冷藏很容易变性。建议先取一点样品，离心后上清沉淀（用buffer洗一下）分别电泳，确定一下沉淀是否是目的蛋白。将洗脱后的样品，最好透析到下一步要用的buffer里，浓缩后（蛋白浓度低易变性），再用0.22um的滤膜除菌后保存。