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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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虫末末: 金币+30 2015-01-16 16:25:52
虫末末: 金币+20 2015-01-16 23:34:31
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8楼: Originally posted by 虫末末 at 2015-01-15 22:35:01
重新取了3天的空白,镊子洗的干干净净,不是取样的污染。
二甲双胍的分子量129,很小,碎片只有2种,130→60和130→71。
晚上都尝试了一下,130→60的响应更好。

今天晚上摸索了一遍,ESI源,会出来很小的峰。 ...

二甲双胍我做过,样本是人血浆。
用氰基柱,QQQ,响应很大,1:3沉淀,稀释50倍,没有基质效应
坚持
11楼2015-01-16 09:40:44
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虫末末

新虫 (小有名气)

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11楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-16 09:40:44
二甲双胍我做过,样本是人血浆。
用氰基柱,QQQ,响应很大,1:3沉淀,稀释50倍,没有基质效应...

恩。下载3篇SCI文章,都是做人血。质谱是QQQ。

现在我取的是ICR,雌鼠血样。不知道是不是种属的区别。我早上重新APCI源,仍旧有基质效应。晚上,走ESI源。

氰基柱,好啊。我现在用SB-C18,保留时间很受质疑。文献说,HILIC柱,氰基柱,效果会好。导师这边感觉可以。但是,我估计很可能到时候得返工,用氰基柱做。
12楼2015-01-16 16:24:59
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虫末末

新虫 (小有名气)

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11楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-16 09:40:44
二甲双胍我做过,样本是人血浆。
用氰基柱,QQQ,响应很大,1:3沉淀,稀释50倍,没有基质效应...

晚上,用ESI源做,发现,离子抑制挺严重的。

对比一下,APCI源,离子增强,很严重。

下一步,暂时不知道怎么办了。
13楼2015-01-16 20:55:02
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rosegarden

金虫 (正式写手)

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13楼: Originally posted by 虫末末 at 2015-01-16 20:55:02
晚上,用ESI源做,发现,离子抑制挺严重的。

对比一下,APCI源,离子增强,很严重。

下一步,暂时不知道怎么办了。...

二甲双胍极性很大,C18上没保留。建议换氰基柱,蛋白沉淀之后稀释50倍,没有基质效应。人血比大鼠血成分要复杂。大鼠的比较好做。
坚持
14楼2015-01-16 20:57:52
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rosegarden

金虫 (正式写手)

你用C18做,肯定在死时间附近出峰,血浆中很多大极性的内源性成分都在这个时候出峰,你在C18分不开。要换柱子,让二甲双胍往后走。
你的质谱型号是什么?响应大就稀释,亲测可用。内标苯乙双胍
坚持
15楼2015-01-16 21:00:56
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虫末末

新虫 (小有名气)

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15楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-16 21:00:56
你用C18做,肯定在死时间附近出峰,血浆中很多大极性的内源性成分都在这个时候出峰,你在C18分不开。要换柱子,让二甲双胍往后走。
你的质谱型号是什么?响应大就稀释,亲测可用。内标苯乙双胍

高手啊。太感谢啦。必须得追加金币啊。

使用C18,老板的意思,为了照顾到极性比较弱的第二个药物;我个人非常想换柱子。实验室没有氰基柱,没办法预实验,所以一直没做成。  

还有一个问题,就是稀释的具体做法 :是在配置标曲和给药血浆,沉淀蛋白之后,再用流动相稀释一定倍数,比如5,10,50倍吗?  没有在文献看到这样的做法啊,这个是不是不可以写在文献里面啊?
16楼2015-01-16 23:32:07
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rosegarden

金虫 (正式写手)

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16楼: Originally posted by 虫末末 at 2015-01-16 23:32:07
高手啊。太感谢啦。必须得追加金币啊。

使用C18,老板的意思,为了照顾到极性比较弱的第二个药物;我个人非常想换柱子。实验室没有氰基柱,没办法预实验,所以一直没做成。  

还有一个问题,就是稀释的具体做 ...

是的,稀释就是用流动相稀释。这个是解决基质效应的一种方法,可以在文献中表达。我用的也是6410B做的,稀释50倍,可以做到10ng。
如果你要两个药物同时测定的话,考虑第二个药物的响应,你肯定无法稀释很多倍。你最好考虑问同学能不能借个柱子,C18原来我也试过,做出来难度还是挺大的。
坚持
17楼2015-01-17 09:29:36
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虫末末

新虫 (小有名气)

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17楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-17 09:29:36
是的,稀释就是用流动相稀释。这个是解决基质效应的一种方法,可以在文献中表达。我用的也是6410B做的,稀释50倍,可以做到10ng。
如果你要两个药物同时测定的话,考虑第二个药物的响应,你肯定无法稀释很多倍。你 ...

恩恩。稀释可以降低内源性干扰,只要峰可以出来就没问题。

我也用6410B。  130.1→60.1。

我用ESI源,Fragmentor80,CE10,纯药响应特别好。但是一测标曲,就没啥信号了。不知道是不是F,CE值选的不合适。因为看师兄使ESI源测的,不知道遇到没有,钟大方论文里说的,ESI源有离子抑制现象。暂时放弃ESI源了。

如果APCI源的话,响应不如ESI源好。我想试试师兄说的稀释的办法,选5倍先试试。

上面所有操作,流动相用的是甲醇/水(10mM乙酸铵)系统,尝试了甲醇沉淀,乙腈沉淀,都有基质效应。
昨晚用乙腈水系统,乙腈沉淀蛋白,甲醇沉淀蛋白,基质效应仍然有。
因为样品量大,SPE不合适。所以样品处理这一步没能调整。

太好了,有做同样药物的虫友指导,真的神速了很多。
后附50金币。
18楼2015-01-17 12:50:13
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虫末末

新虫 (小有名气)

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17楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-17 09:29:36
是的,稀释就是用流动相稀释。这个是解决基质效应的一种方法,可以在文献中表达。我用的也是6410B做的,稀释50倍,可以做到10ng。
如果你要两个药物同时测定的话,考虑第二个药物的响应,你肯定无法稀释很多倍。你 ...

没找到继续给金币的链接
19楼2015-01-17 12:54:56
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rosegarden

金虫 (正式写手)

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18楼: Originally posted by 虫末末 at 2015-01-17 12:50:13
恩恩。稀释可以降低内源性干扰,只要峰可以出来就没问题。

我也用6410B。  130.1→60.1。

我用ESI源,Fragmentor80,CE10,纯药响应特别好。但是一测标曲,就没啥信号了。不知道是不是F,CE值选 ...

我是专门做分析的。
你看钟大放老师的文章,他说的APCI比ESI更容易产生介质效应。这个针对某些物质,确实是这样的。但是,你不能把它当做一个通用的定律。
根据,我做生物分析的经验,95%的分析都是用ESI源做的。我觉得你换源没有用。
而且,你的主要矛盾是你的样品在C18上无法分离,最好的办法是换柱子。
ESI源 F 90 CE 15
人血浆要比大鼠血浆复杂,你往下稀释肯定是能重现我的方法的。我用这个方法做了七百多个样品,方法非常稳定。
坚持
20楼2015-01-17 19:39:56
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