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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 空白雌鼠血测到了我的药物。怎么继续搞下去？
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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虫末末: 金币+30 2015-01-16 16:25:52
虫末末: 金币+20 2015-01-16 23:34:31
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8楼: Originally posted by 虫末末 at 2015-01-15 22:35:01
重新取了3天的空白，镊子洗的干干净净，不是取样的污染。
二甲双胍的分子量129，很小，碎片只有2种，130→60和130→71。
晚上都尝试了一下，130→60的响应更好。

今天晚上摸索了一遍，ESI源，会出来很小的峰。 ...

二甲双胍我做过，样本是人血浆。
用氰基柱，QQQ，响应很大，1:3沉淀，稀释50倍，没有基质效应
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11楼2015-01-16 09:40:44
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虫末末

新虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-16 09:40:44
二甲双胍我做过，样本是人血浆。
用氰基柱，QQQ，响应很大，1:3沉淀，稀释50倍，没有基质效应...

恩。下载3篇SCI文章，都是做人血。质谱是QQQ。

现在我取的是ICR，雌鼠血样。不知道是不是种属的区别。我早上重新APCI源，仍旧有基质效应。晚上，走ESI源。

氰基柱，好啊。我现在用SB-C18，保留时间很受质疑。文献说，HILIC柱，氰基柱，效果会好。导师这边感觉可以。但是，我估计很可能到时候得返工，用氰基柱做。
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12楼2015-01-16 16:24:59
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虫末末

新虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-16 09:40:44
二甲双胍我做过，样本是人血浆。
用氰基柱，QQQ，响应很大，1:3沉淀，稀释50倍，没有基质效应...

晚上，用ESI源做，发现，离子抑制挺严重的。

对比一下，APCI源，离子增强，很严重。

下一步，暂时不知道怎么办了。
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13楼2015-01-16 20:55:02
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rosegarden

金虫 (正式写手)
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13楼: Originally posted by 虫末末 at 2015-01-16 20:55:02
晚上，用ESI源做，发现，离子抑制挺严重的。

对比一下，APCI源，离子增强，很严重。

下一步，暂时不知道怎么办了。...

二甲双胍极性很大，C18上没保留。建议换氰基柱，蛋白沉淀之后稀释50倍，没有基质效应。人血比大鼠血成分要复杂。大鼠的比较好做。
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14楼2015-01-16 20:57:52
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rosegarden

金虫 (正式写手)
你用C18做，肯定在死时间附近出峰，血浆中很多大极性的内源性成分都在这个时候出峰，你在C18分不开。要换柱子，让二甲双胍往后走。
你的质谱型号是什么？响应大就稀释，亲测可用。内标苯乙双胍
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15楼2015-01-16 21:00:56
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虫末末

新虫 (小有名气)
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15楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-16 21:00:56
你用C18做，肯定在死时间附近出峰，血浆中很多大极性的内源性成分都在这个时候出峰，你在C18分不开。要换柱子，让二甲双胍往后走。
你的质谱型号是什么？响应大就稀释，亲测可用。内标苯乙双胍

高手啊。太感谢啦。必须得追加金币啊。

使用C18，老板的意思，为了照顾到极性比较弱的第二个药物；我个人非常想换柱子。实验室没有氰基柱，没办法预实验，所以一直没做成。  

还有一个问题，就是稀释的具体做法 ：是在配置标曲和给药血浆，沉淀蛋白之后，再用流动相稀释一定倍数，比如5,10，50倍吗？  没有在文献看到这样的做法啊，这个是不是不可以写在文献里面啊？
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16楼2015-01-16 23:32:07
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rosegarden

金虫 (正式写手)
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16楼: Originally posted by 虫末末 at 2015-01-16 23:32:07
高手啊。太感谢啦。必须得追加金币啊。

使用C18，老板的意思，为了照顾到极性比较弱的第二个药物；我个人非常想换柱子。实验室没有氰基柱，没办法预实验，所以一直没做成。  

还有一个问题，就是稀释的具体做 ...

是的，稀释就是用流动相稀释。这个是解决基质效应的一种方法，可以在文献中表达。我用的也是6410B做的，稀释50倍，可以做到10ng。
如果你要两个药物同时测定的话，考虑第二个药物的响应，你肯定无法稀释很多倍。你最好考虑问同学能不能借个柱子，C18原来我也试过，做出来难度还是挺大的。
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17楼2015-01-17 09:29:36
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虫末末

新虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-17 09:29:36
是的，稀释就是用流动相稀释。这个是解决基质效应的一种方法，可以在文献中表达。我用的也是6410B做的，稀释50倍，可以做到10ng。
如果你要两个药物同时测定的话，考虑第二个药物的响应，你肯定无法稀释很多倍。你 ...

恩恩。稀释可以降低内源性干扰，只要峰可以出来就没问题。

我也用6410B。  130.1→60.1。

我用ESI源，Fragmentor80，CE10，纯药响应特别好。但是一测标曲，就没啥信号了。不知道是不是F，CE值选的不合适。因为看师兄使ESI源测的，不知道遇到没有，钟大方论文里说的，ESI源有离子抑制现象。暂时放弃ESI源了。

如果APCI源的话，响应不如ESI源好。我想试试师兄说的稀释的办法，选5倍先试试。

上面所有操作，流动相用的是甲醇/水（10mM乙酸铵）系统，尝试了甲醇沉淀，乙腈沉淀，都有基质效应。
昨晚用乙腈水系统，乙腈沉淀蛋白，甲醇沉淀蛋白，基质效应仍然有。
因为样品量大，SPE不合适。所以样品处理这一步没能调整。

太好了，有做同样药物的虫友指导，真的神速了很多。
后附50金币。
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18楼2015-01-17 12:50:13
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虫末末

新虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-17 09:29:36
是的，稀释就是用流动相稀释。这个是解决基质效应的一种方法，可以在文献中表达。我用的也是6410B做的，稀释50倍，可以做到10ng。
如果你要两个药物同时测定的话，考虑第二个药物的响应，你肯定无法稀释很多倍。你 ...

没找到继续给金币的链接
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19楼2015-01-17 12:54:56
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rosegarden

金虫 (正式写手)
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18楼: Originally posted by 虫末末 at 2015-01-17 12:50:13
恩恩。稀释可以降低内源性干扰，只要峰可以出来就没问题。

我也用6410B。  130.1→60.1。

我用ESI源，Fragmentor80，CE10，纯药响应特别好。但是一测标曲，就没啥信号了。不知道是不是F，CE值选 ...

我是专门做分析的。
你看钟大放老师的文章，他说的APCI比ESI更容易产生介质效应。这个针对某些物质，确实是这样的。但是，你不能把它当做一个通用的定律。
根据，我做生物分析的经验，95%的分析都是用ESI源做的。我觉得你换源没有用。
而且，你的主要矛盾是你的样品在C18上无法分离，最好的办法是换柱子。
ESI源 F 90 CE 15
人血浆要比大鼠血浆复杂，你往下稀释肯定是能重现我的方法的。我用这个方法做了七百多个样品，方法非常稳定。
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20楼2015-01-17 19:39:56
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