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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Msp I 和Hha I 双酶切后200bp下的挑带没有跑开
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moqigang

新虫 (初入文坛)

[求助] Msp I 和Hha I 双酶切后200bp下的挑带没有跑开 已有1人参与

Msp I 和Hha I 双酶切后200bp下的挑带没有跑开，用的3.5%的胶，140v，40分钟,加了5ul的样和1ul的buffer
双酶切体系  10ul
Hha I           0.2
Msp I           0.2
10X M Buffer       1ul
DNA                 6ul
ddH2O             2.6ul

Msp I 和Hha I 双酶切后200bp下的挑带没有跑开
1.133.jpg
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1楼 2015-01-14 11:22:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
moqigang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:01:17
理论上应该是怎样的带型分布，切的是质粒吗？
感觉你的酶切好像不完全。你有没有跑未经酶切的质粒和单酶切的样品？
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2楼2015-01-14 15:20:01
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moqigang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-01-14 15:20:01
理论上应该是怎样的带型分布，切的是质粒吗？
感觉你的酶切好像不完全。你有没有跑未经酶切的质粒和单酶切的样品？

切的PCR产物，跑过未经酶切的，单酶切的现在正在弄，不知道结果怎么样。酶切不完全 是怎么说，新手，不是很懂
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3楼2015-01-14 16:36:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by moqigang at 2015-01-14 16:36:40
切的PCR产物，跑过未经酶切的，单酶切的现在正在弄，不知道结果怎么样。酶切不完全 是怎么说，新手，不是很懂...

酶切位点在PCR产物的中间还是两端？如果在两端，酶切的效率会比中间差，通常需要延长时间或稍加大剂量。不同的酶也是不一样的，你用的这两个酶我都没有用过，不太好说。
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-15 08:30:35
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moqigang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-01-15 08:30:35
酶切位点在PCR产物的中间还是两端？如果在两端，酶切的效率会比中间差，通常需要延长时间或稍加大剂量。不同的酶也是不一样的，你用的这两个酶我都没有用过，不太好说。...

不是很清楚，这两个酶也是看文献看到的，不是很懂，昨天单酶切挺好的，能分开带，
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5楼2015-01-15 14:35:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by moqigang at 2015-01-15 14:35:35
不是很清楚，这两个酶也是看文献看到的，不是很懂，昨天单酶切挺好的，能分开带，...

把PCR产物测序看看
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6楼2015-01-15 23:21:05
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