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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：怎么检测RT产物的质量
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liuli124125

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助：怎么检测RT产物的质量

各位高手，谁知道在做PCR之前想检测一下RT是否成功，可以用什么方法呀。急待回复，先谢过了
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1楼 2008-06-01 23:00:51
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yangym1123

木虫 (小有名气)
用内参基因即管家基因扩增RT产物看效果！如果得到大小和预期一致并且亮度均一的条带，说明RT还可以哦！个人建议！
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2楼2008-06-02 12:11:12
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Kiddy

金虫 (小有名气)
同意楼上！
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3楼2008-06-02 16:46:30
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liuli124125

铜虫 (初入文坛)
我用的是两步法进行RT-PCR，没得到想要的结果，想看看到底是反转就没转成功还是后面的PCR条件不对，但不知道cDNA能用凝胶电泳检测出来不。
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4楼2008-06-03 16:32:14
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donna181

金虫 (小有名气)
同意二楼的观点,应该说用内参基因引物,以反转录产物作为模板进行PCR,得到的条带和亮度与预期一致,就说明你的模板没有问题,可以进行下一步的目的基因扩增.如果你的内参基因的亮度很高,反转录产物可以进行必要倍数的稀释,比如5倍,10倍,再进行目的基因的扩增,也是没有问题的.
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5楼2008-06-04 09:57:19
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donna181

金虫 (小有名气)
再补充一点就是:没有必要进行电泳了
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6楼2008-06-04 09:58:27
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liuli124125

铜虫 (初入文坛)
谢谢各位的答复了
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7楼2008-06-05 23:16:33
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xiaricha

银虫 (小有名气)
内参基因引物怎么设计啊？没接触过啊
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8楼2008-06-09 21:13:04
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