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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] TA可隆后白斑菌落摇不出来?

大家好!
     我经TA可隆后,在氨苄板上长 出了蓝白 斑,蓝斑先长 ,白斑出现的慢 ,挑取白斑到氨苄LB液体培养基中37度 摇 ,可是出现了长 不出来的情况,请问这 是什么原因?谢谢!
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greenspringmi

银虫 (正式写手)


lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):呵呵,谢谢。
l蓝白斑筛选的准确率还是有争议的(本人感觉很差,整个实验室已经放弃该法);
菌落PCR的检出率准确率还是相当高的,
做个菌落PCR看看吧,再摇菌,麻烦一点,但是因为其准确率好,其实节约了更多时间
2楼2008-06-01 20:56:14
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humants

金虫 (正式写手)


lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):谢谢,可能还是颜色的准确度不够。欢迎常来
你可以从下面两个来分析:
1.你倒板的时候是不是太热了,抗生素失活,建议做一下对照板。
2.平板培养的时间太长了,抗生素失效,长生了没有质粒的卫星菌落,挑菌落的时候注意挑那些大的,尽量不调扎堆的。
祝你好运!
3楼2008-06-01 21:34:15
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clf0803

银虫 (正式写手)

我培养了2天,因为24h时白斑几乎没有,所以又培养了一天
4楼2008-06-02 20:54:17
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碧荷叶

铜虫 (初入文坛)

培养两天时间有点长,氨苄可能失活了长出没有质粒的菌落
5楼2008-06-03 08:52:25
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flyrain363

木虫 (正式写手)

“我培养了2天,因为24h时白斑几乎没有,所以又培养了一天 ”

由此可见,肯定是假阳性
6楼2008-06-03 09:49:59
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lybio

金虫 (正式写手)

我做实验的时候也遇到这问题,第一天没长,放着第二天,菌就长出来了,挑到AMP液体摇,大部分长不出,有些还是能长的,但菌液PCR、酶切鉴定,都表明它不是我所需要的
7楼2008-06-03 09:52:27
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ice-2008

金虫 (小有名气)

培养时间太长了,应该是假阳性了
8楼2008-06-16 07:57:10
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月月大可

木虫 (著名写手)

在37度环境下Amp过夜就失效了。Amp只是抑制生长,而不是杀死细胞,所以没有转化成功的感受态细胞在Amp失效后就继续生长。
菌落PCR还不错,能大量筛选,不过有不少人对此法有一定的怀疑。最好再做酶切,如果酶切处目标条带,应该时很可靠的。
9楼2008-06-16 08:53:35
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mayw

铜虫 (初入文坛)

我曾遇到过同时培养的菌有的长的快,有的不长
克隆好多问题出在培养基和水上,建议把培养基好好挑一下ph,一般情况下高压后会使得ph降低,可以把ph调到7.3-7.5试一下
10楼2009-05-20 18:15:28
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