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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » TA可隆后白斑菌落摇不出来？
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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] TA可隆后白斑菌落摇不出来？

大家好！
     我经TA可隆后，在氨苄板上长 出了蓝白 斑，蓝斑先长 ，白斑出现的慢 ，挑取白斑到氨苄LB液体培养基中37度 摇 ，可是出现了长 不出来的情况，请问这 是什么原因？谢谢！
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1楼 2008-06-01 19:30:29
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):呵呵，谢谢。
l蓝白斑筛选的准确率还是有争议的（本人感觉很差，整个实验室已经放弃该法）；
菌落PCR的检出率准确率还是相当高的，
做个菌落PCR看看吧，再摇菌，麻烦一点，但是因为其准确率好，其实节约了更多时间
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2楼2008-06-01 20:56:14
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humants

金虫 (正式写手)
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):谢谢，可能还是颜色的准确度不够。欢迎常来
你可以从下面两个来分析：
1.你倒板的时候是不是太热了，抗生素失活，建议做一下对照板。
2.平板培养的时间太长了，抗生素失效，长生了没有质粒的卫星菌落，挑菌落的时候注意挑那些大的，尽量不调扎堆的。
祝你好运！
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3楼2008-06-01 21:34:15
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clf0803

银虫 (正式写手)
我培养了2天，因为24h时白斑几乎没有，所以又培养了一天
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4楼2008-06-02 20:54:17
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碧荷叶

铜虫 (初入文坛)
培养两天时间有点长，氨苄可能失活了长出没有质粒的菌落
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5楼2008-06-03 08:52:25
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flyrain363

木虫 (正式写手)
“我培养了2天，因为24h时白斑几乎没有，所以又培养了一天 ”

由此可见，肯定是假阳性
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6楼2008-06-03 09:49:59
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lybio

金虫 (正式写手)
我做实验的时候也遇到这问题，第一天没长，放着第二天，菌就长出来了，挑到AMP液体摇，大部分长不出，有些还是能长的，但菌液PCR、酶切鉴定，都表明它不是我所需要的
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7楼2008-06-03 09:52:27
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ice-2008

金虫 (小有名气)
培养时间太长了，应该是假阳性了
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8楼2008-06-16 07:57:10
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月月大可

木虫 (著名写手)
在37度环境下Amp过夜就失效了。Amp只是抑制生长，而不是杀死细胞，所以没有转化成功的感受态细胞在Amp失效后就继续生长。
菌落PCR还不错，能大量筛选，不过有不少人对此法有一定的怀疑。最好再做酶切，如果酶切处目标条带，应该时很可靠的。
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9楼2008-06-16 08:53:35
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mayw

铜虫 (初入文坛)
我曾遇到过同时培养的菌有的长的快，有的不长
克隆好多问题出在培养基和水上，建议把培养基好好挑一下ph，一般情况下高压后会使得ph降低，可以把ph调到7.3-7.5试一下
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10楼2009-05-20 18:15:28
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