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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 急求高手帮忙解决 植株GFP发光在紫外灯下拍照问题 已有4人参与

我做了一个植物病毒表达载体（带eGFP），农杆菌侵染侵染植株后，在共聚焦下能观察到GFP发光，但是用长波紫外灯（365nm）照射植株苗的时候看不到发光。我现在就想得到像别人文献报道的那种图片效果。就大家帮忙分析下原因，急求大家给点建议。要是有人做过植物转基因后或农杆菌侵染瞬时表达GFP发光，在紫外灯下拍照的就最好了。我现在主要怀疑有两方面问题：一、是否我构的GFP不适合整个植株在紫外灯下观察？二、是不本实验室的紫外灯拍照效果不行或都拍照的时候需要其它特殊处理（如加滤光片等）。真诚希望大家的帮助，若有谁能帮咱解决问题。BB要多少给多少！！！

急求高手帮忙解决  植株GFP发光在紫外灯下拍照问题
别人文献中GFP发光图片.png
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1楼 2015-01-11 13:59:18
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-11 19:40:19
应该是第二种可能，有可能是紫外灯的好坏，便宜的找不出那个图片

实验室用的紫外灯参考文献中引用的   还从美国买回来的   一个破灯   花了好几千了   算是不便宜了   可就是不知道功能好不好了。   你有拍过像这样GFP发光的吗
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3楼2015-01-11 19:56:10
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红卫大兵

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tuodecai at 2015-01-11 19:56:10
实验室用的紫外灯参考文献中引用的   还从美国买回来的   一个破灯   花了好几千了   算是不便宜了   可就是不知道功能好不好了。   你有拍过像这样GFP发光的吗...

我们只是看一下表不表达，用的是那种一万多一个的照灯，你照的时候可以先冲15分钟后在照
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4楼2015-01-12 13:16:58
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-12 13:16:58
我们只是看一下表不表达，用的是那种一万多一个的照灯，你照的时候可以先冲15分钟后在照...

你们用的这么贵的灯啊！是用的手提示紫外灯吗？不是特殊的仪器吧？跟你们的一比，  那我们实验室的真是便宜货了。  我试过先把灯开久一些（会有30分钟）再照的， 也不行的。最后灯烫得要死，叶片一碰到灯，叶片都烫坏了。
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5楼2015-01-12 14:53:06
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沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
tuodecai: 金币+3, ★有帮助, 谢谢你的回复 2015-09-13 00:02:03
你的东西和文献上的不一样，你的只是瞬时表达吧，如果想要更强的可加一个沉默抑制子，文献上的是cDNA clone，看看时间14d，是病毒。所以答案我认为是第一个不适合。
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6楼2015-09-12 09:13:47
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 沉默的独角兽 at 2015-09-12 09:13:47
你的东西和文献上的不一样，你的只是瞬时表达吧，如果想要更强的可加一个沉默抑制子，文献上的是cDNA clone，看看时间14d，是病毒。所以答案我认为是第一个不适合。

其实我搞的跟文献上一样的都是病毒。经我后续实验发现，主要跟实验材料有重大关系，不同的植株上发光差别较大。在烟草的效果最好。
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7楼2015-09-13 00:04:56
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沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by tuodecai at 2015-09-13 00:04:56
其实我搞的跟文献上一样的都是病毒。经我后续实验发现，主要跟实验材料有重大关系，不同的植株上发光差别较大。在烟草的效果最好。...

不好意思，没看清，那这样的话，灯不知道用的哪一种，文献上的灯好像买的是国外的。第二，你的病毒侵染后的症状分布，第三，GFP如何表达，是多聚蛋白还是亚启动子？
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9楼2015-09-13 11:35:12
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沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by tuodecai at 2015-09-13 00:04:56
其实我搞的跟文献上一样的都是病毒。经我后续实验发现，主要跟实验材料有重大关系，不同的植株上发光差别较大。在烟草的效果最好。...

补充一下，的确不同的病毒表达外源蛋白的量不一定大。在不同寄主上表达量也有差异，本氏烟一般比较好。还有体外转录那篇文献找不着了，抱歉。
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10楼2015-09-13 13:37:31
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by huizhenli at 2016-02-24 20:34:18
楼主能不能分享一下文献，多谢了，最近也在做在拟南芥中瞬时表达荧光的实验

可以的。你告诉下邮箱。不过我那文献是gfp在病毒载体上的。

发自小木虫Android客户端
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12楼2016-02-25 00:08:51
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 未来和现在 at 2016-03-24 17:26:29
你好，我想问一下你用的设备是什么，型号信息可以告诉我一下吗，确定可以拍出文献的那种图片吗

灯的型号信息见我给你拍的照片。用这个灯，拍烟草的话可以拍出文献中的那种效果（我有试过），但拍不同的实验材料可能差别比较大。
急求高手帮忙解决  植株GFP发光在紫外灯下拍照问题-1
紫外灯.jpg
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14楼2016-03-25 10:07:52
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 未来和现在 at 2016-04-12 21:28:41
楼主，我想问一下你的仪器是什么价位的，有带有相机吗，还是需要自己另买相机？谢谢了，很感谢啊！

好像要了好几千（大概3-4k）,没有相机的，就只是一个灯而已，反正刚买来，感觉不值那个价。当时是直接从国外买的，可能贵了点儿。
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20楼2016-04-14 22:56:37
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 未来和现在 at 2016-04-18 11:10:47
直接用单反可以拍吗，你是怎么拍照的呢

就是找一个帮手，一个人拿紫外灯照着，另一个人拍照。

发自小木虫Android客户端
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24楼2016-04-18 23:34:33
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普通回帖

红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tuodecai: 金币+2, ★有帮助, 谢谢您的积极回复！ 2015-01-11 19:56:11
应该是第二种可能，有可能是紫外灯的好坏，便宜的找不出那个图片
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2楼2015-01-11 19:40:19
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workhoic

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

个人觉得是你紫外光波长没有选择好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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相信自己是获得成功的基础！
8楼2015-09-13 01:30:11
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