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金虫 (小有名气)

[求助] 做小麦优质亚基Dx5,PCR后,检测不出来不知为什么? 已有2人参与

5 亚 基 引 物  :
5′-GCCTAGCAACCTTCACAATC-3′
5′-GAAACCTGCTGCGGACAAGT-3′

PCR体系10ul

DNA:1ul
引物:0.4ul
taq酶:0.12
dNTP:0.16ul
10xbufer:1ul
dd水:7.32ul


反应条件:
预变性;94℃,5min
94℃,1min
55℃,45s
72℃,30s
72℃,10min
12℃,∞

SDS-PAGE电泳图如下,

做小麦优质亚基Dx5,PCR后,检测不出来不知为什么?
IMG_20150109_142135.jpg
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Ialwaysfeelgrief!
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR后,为啥不用琼脂糖跑电泳?
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-13 16:36:29
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
片段长度多少?为何要用PAGE?
2楼2015-01-12 20:20:04
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-12 20:20:04
片段长度多少?为何要用PAGE?

450左右,这个更精细些!不过在图片上带的位置差不多,就是这个群体不会都有带的!难道是引物的问题?

[ 发自小木虫客户端 ]
Ialwaysfeelgrief!
4楼2015-01-13 22:15:37
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-13 16:36:29
PCR后,为啥不用琼脂糖跑电泳?

也跑过,就是都出现上图那样一条带,而理论上不应该都有

[ 发自小木虫客户端 ]
Ialwaysfeelgrief!
5楼2015-01-13 22:18:18
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