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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做小麦优质亚基Dx5，PCR后，检测不出来不知为什么？
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waiting_over

金虫 (小有名气)

[求助] 做小麦优质亚基Dx5，PCR后，检测不出来不知为什么？ 已有2人参与

5 亚 基 引 物  :
5′-GCCTAGCAACCTTCACAATC-3′
5′-GAAACCTGCTGCGGACAAGT-3′

PCR体系10ul

DNA：1ul
引物：0.4ul
taq酶：0.12
dNTP:0.16ul
10xbufer：1ul
dd水：7.32ul


反应条件：
预变性；94℃，5min
94℃，1min
55℃，45s
72℃，30s
72℃,10min
12℃，∞

SDS-PAGE电泳图如下，

做小麦优质亚基Dx5，PCR后，检测不出来不知为什么？
IMG_20150109_142135.jpg
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Ialwaysfeelgrief!
1楼 2015-01-11 11:25:48
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
片段长度多少？为何要用PAGE？
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2楼2015-01-12 20:20:04
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR后，为啥不用琼脂糖跑电泳？
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-13 16:36:29
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waiting_over

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-12 20:20:04
片段长度多少？为何要用PAGE？

450左右，这个更精细些！不过在图片上带的位置差不多，就是这个群体不会都有带的！难道是引物的问题？

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Ialwaysfeelgrief!
4楼2015-01-13 22:15:37
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waiting_over

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-13 16:36:29
PCR后，为啥不用琼脂糖跑电泳？

也跑过，就是都出现上图那样一条带，而理论上不应该都有

[ 发自小木虫客户端 ]
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Ialwaysfeelgrief!
5楼2015-01-13 22:18:18
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