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凝胶回收问题
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在凝胶回收时候出了问题：用试剂盒回收了三次都没回收回来，我是严格按照说明书进行的，请高手指导！不胜感激！ 胶回收时条带非常清晰，按照试剂盒说明书进行回收，回收完后，我将回收产物再次凝胶电泳检测，可是没有条带，我已经做了三次，每次结果都一样，我真不知道问题出在了哪里，请高手教我！ |
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lixiaoyi1981(金币+3,VIP+0):谢谢，非常好
lixiaoyi1981(金币+3,VIP+0):谢谢，非常好
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胶回收试剂盒国产的就很好用，建议你： 1、再把说明书仔细地重新审阅一遍 2、严格按照说明书要求来操作，一般说明 书里会有问题解答，建议你把那些东西看看 3、根据自己的经验，对你的回收步骤有以下三点建议： 2，将融化的胶冷却到室温，然后加入到高载量离心吸附柱内，每 个柱子内加200ul冷却到室温的融胶液，25摄氏度 100000rpm 1min，弃收集管内的液体：融化的胶直接加入柱子中，不需要冷却；转速一般是1，2000rpm；温度没有明显影响；最重要的一点：融化的胶一般只要不超过柱子的承受能力，是把其分次加入柱子中离心收集的，这样回收的量会加大！！！ 5，25摄氏度 100000rpm 1min，甩净高载量离心吸附柱内的液体 ：这一步中，转速一般也是1，2000rpm；时间可以再延长点，三分钟，这一步主要是把柱子上的乙醇除净，以免影响下游实验； 6，将离心吸附柱放入灭菌饿自备的1.5ml的EP馆内，加入20ul试剂盒自带的类似于TE的缓冲液洗柱子，室温静止3min，25摄氏度 100000rpm 1min：试试转速问题啊，也是建议1，2000rpm； 最后，有两点：1、以说明书为准； 2、可以把检测的上样量加大一些，再检测一下，也许是回收效率太低了 |
8楼2008-05-30 18:54:47
ypan
木虫 (著名写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 2161.6
- 红花: 1
- 帖子: 1017
- 在线: 115.3小时
- 虫号: 314413
- 注册: 2007-02-25
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2008-05-30 13:41:04
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reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
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1，紫外灯下切胶100mg，加融胶液400ul，捣碎。65摄氏度水浴10分钟，期间每个三分钟颠倒一次 2，将融化的胶冷却到室温，然后加入到高载量离心吸附柱内，每个柱子内加200ul冷却到室温的融胶液，25摄氏度 100000rpm 1min，弃收集管内的液体 3，将500ul洗柱液加入到高载量吸附柱内，室温静止3min，25摄氏度 100000rpm 1min，弃收集管内的液体 4，重复3 一次 5，25摄氏度 100000rpm 1min，甩净高载量离心吸附柱内的液体 6，将离心吸附柱放入灭菌饿自备的1.5ml的EP馆内，加入20ul试剂盒自带的类似于TE的缓冲液洗柱子，室温静止3min，25摄氏度 100000rpm 1min 7，4摄氏度保存回收产物 紧接着我用百分之1.5的琼脂糖凝胶检测回收结果 但是没有条带，但是Marker带清晰 所以我的结论是：没有回收回来。 我已经做了3次了，都是 这样，不知道什么原因 请高手赐教！ 谢谢 |
3楼2008-05-30 14:11:51
4楼2008-05-30 14:55:11
