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jon0901327

新虫 (初入文坛)

[交流] 凝胶回收问题

在凝胶回收时候出了问题:用试剂盒回收了三次都没回收回来,我是严格按照说明书进行的,请高手指导!不胜感激!

胶回收时条带非常清晰,按照试剂盒说明书进行回收,回收完后,我将回收产物再次凝胶电泳检测,可是没有条带,我已经做了三次,每次结果都一样,我真不知道问题出在了哪里,请高手教我!
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jon0901327

新虫 (初入文坛)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
1,紫外灯下切胶100mg,加融胶液400ul,捣碎。65摄氏度水浴10分钟,期间每个三分钟颠倒一次
2,将融化的胶冷却到室温,然后加入到高载量离心吸附柱内,每个柱子内加200ul冷却到室温的融胶液,25摄氏度 100000rpm  1min,弃收集管内的液体
3,将500ul洗柱液加入到高载量吸附柱内,室温静止3min,25摄氏度 100000rpm  1min,弃收集管内的液体
4,重复3 一次
5,25摄氏度 100000rpm  1min,甩净高载量离心吸附柱内的液体
6,将离心吸附柱放入灭菌饿自备的1.5ml的EP馆内,加入20ul试剂盒自带的类似于TE的缓冲液洗柱子,室温静止3min,25摄氏度 100000rpm  1min
7,4摄氏度保存回收产物

紧接着我用百分之1.5的琼脂糖凝胶检测回收结果
但是没有条带,但是Marker带清晰

所以我的结论是:没有回收回来。

我已经做了3次了,都是 这样,不知道什么原因

请高手赐教!
谢谢
3楼2008-05-30 14:11:51
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查看全部 16 个回答

ypan

木虫 (著名写手)

把你的实验操作步骤写出来看看!
2楼2008-05-30 13:41:04
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

100000rpm是不是太大了?
我做胶回收都是使用Qiagen的试剂盒,没出现过问题。
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
4楼2008-05-30 14:55:11
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flyrain363

木虫 (正式写手)

哪个公司的试剂盒啊?

哪个公司的试剂盒啊?
100000rpm 太大了。回收片段多大?5000rpm足够。
5楼2008-05-30 15:05:57
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