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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jon0901327

新虫 (初入文坛)

[交流] 凝胶回收问题

在凝胶回收时候出了问题:用试剂盒回收了三次都没回收回来,我是严格按照说明书进行的,请高手指导!不胜感激!

胶回收时条带非常清晰,按照试剂盒说明书进行回收,回收完后,我将回收产物再次凝胶电泳检测,可是没有条带,我已经做了三次,每次结果都一样,我真不知道问题出在了哪里,请高手教我!
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hotdunk

金虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
你都做了胶回收了回收的产物还要再检测一次干什么呢?回收前条带很亮说明量多,那也就在那100mg的胶里,你加了400ul溶胶液,最后离干净了用20*2ul Elution Buffer洗脱,这个体系本来就有损失,还能剩多少?你把最后的回收产物再醇沉了重溶跑跑看,肯定都没第一次切胶前的亮度高~ 回收完就直接连接什么的了,没必要检测~ 连不上了再回来检测怀疑这里的毛病也不晚~

PS:10000rpm无所谓,我13000也没失败过。不过那个65度十分钟没啥必要,目测一下溶了就行,高温长时间也不好。
爱情来得快去得也快,只有猪肉卷是永恒的!
11楼2008-05-31 09:23:38
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ypan

木虫 (著名写手)

把你的实验操作步骤写出来看看!
2楼2008-05-30 13:41:04
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jon0901327

新虫 (初入文坛)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
1,紫外灯下切胶100mg,加融胶液400ul,捣碎。65摄氏度水浴10分钟,期间每个三分钟颠倒一次
2,将融化的胶冷却到室温,然后加入到高载量离心吸附柱内,每个柱子内加200ul冷却到室温的融胶液,25摄氏度 100000rpm  1min,弃收集管内的液体
3,将500ul洗柱液加入到高载量吸附柱内,室温静止3min,25摄氏度 100000rpm  1min,弃收集管内的液体
4,重复3 一次
5,25摄氏度 100000rpm  1min,甩净高载量离心吸附柱内的液体
6,将离心吸附柱放入灭菌饿自备的1.5ml的EP馆内,加入20ul试剂盒自带的类似于TE的缓冲液洗柱子,室温静止3min,25摄氏度 100000rpm  1min
7,4摄氏度保存回收产物

紧接着我用百分之1.5的琼脂糖凝胶检测回收结果
但是没有条带,但是Marker带清晰

所以我的结论是:没有回收回来。

我已经做了3次了,都是 这样,不知道什么原因

请高手赐教!
谢谢
3楼2008-05-30 14:11:51
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

100000rpm是不是太大了?
我做胶回收都是使用Qiagen的试剂盒,没出现过问题。
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
4楼2008-05-30 14:55:11
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