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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 凝胶回收出了问题，请高手指导！谢谢
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
如果初始量很大 你不怀疑你的操作水平的话 那就是试剂盒有问题 你可以订一些好的试剂盒 TAKARa不错 不会有问题
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11楼2008-09-08 19:48:09
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
你跑胶浓度多大？加大溶胶液的量。我怀疑你超过100ul
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12楼2008-09-08 22:31:37
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hlf11165

割胶的时候尽量不要割废胶~其次如果操作没有问题的话就是片段大小的问题了 我觉得太大可能会断不至于没有 所以我推断是你的片段太小了还有商业的东西里面的说明书其实不能全信尤其是片段过小50-100 基本上用试剂盒回收不到的 吸附不住的 （这个是我一老师博士论文的时候发现的） 具体我没操作过 可以参考下 如果要回收50-100 左右的 可以买个普雷斯顿的一个回收产品
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13楼2008-09-09 00:16:29
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xipha

木虫 (正式写手)
我们实验室出过一次这样的，是WashingBuffer没加乙醇，楼主检查下
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14楼2008-09-09 09:23:52
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darkblue111

铜虫 (初入文坛)
可能原因：1. 洗脱液加多了，回收体系有点少。可以加大回收体系，我一般都是150到200微升体系。最后洗脱液加少点，20到25微升。
2.回收完后，电泳几分钟就可以了，时间长了是会看不到或很淡。如果做事做TA克隆的话，只要电泳能看到一点弱带，就能够连接上
3。试剂盒过期了，不好用了
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15楼2008-09-09 10:04:42
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yierangel

金虫 (小有名气)
还有一种可能是洗柱后乙醇没有彻底晾干，这步很重要的。
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16楼2008-09-11 17:03:15
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humants

金虫 (正式写手)
我刚解决这问题，我前几天 也这样，你看看回收完电泳时，上样的时候是不是显色剂向上漂得厉害？
如果是，把Elution Buffer 换成灭菌双蒸水试试看，应该能解决，我就是这么办的！！
祝你好运
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17楼2008-09-11 18:16:47
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