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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jon0901327

新虫 (初入文坛)

[交流] 凝胶回收出了问题,请高手指导!谢谢

我在凝胶回收时候出了问题:用试剂盒回收了三次都没回收回来,我是严格按照说明书进行的,请高手指导!不胜感激!

胶回收时条带非常清晰,按照试剂盒说明书进行回收,回收完后,我将回收产物再次凝胶电泳检测,可是没有条带,我已经做了三次,每次结果都一样,我真不知道问题出在了哪里,请高手教我!
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darkblue111

铜虫 (初入文坛)

可能原因:1. 洗脱液加多了,回收体系有点少。可以加大回收体系,我一般都是150到200微升体系。最后洗脱液加少点,20到25微升。
2.回收完后,电泳几分钟就可以了,时间长了是会看不到或很淡。如果做事做TA克隆的话,只要电泳能看到一点弱带,就能够连接上
3。试剂盒过期了,不好用了
15楼2008-09-09 10:04:42
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weiwei1

木虫 (小有名气)

试剂盒不好,换别的牌子的
2楼2008-05-30 12:58:48
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月月大可

木虫 (著名写手)

问下一,洗脱DNA你用的是什么?试剂盒中的TE还是超纯水?如果是超纯水一定注意超纯水的pH,pH低了洗脱效果很不好
3楼2008-05-30 13:43:34
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jon0901327

新虫 (初入文坛)

我用的是新长江的试剂盒
洗脱DNA时,用的试剂盒自带的洗脱液EB(Eluent buffer)
操作步骤按照说明书进行
真是做了一点修改:
修改一:胶融化后,我让融化的胶冷却到室温后上柱子(试剂盒上没说要冷却,我是参考的其它一些试剂盒说明书做的修改)
修改二:每次上柱子后,我都让它室温静止3分钟,然后离心(试剂盒上没说是否静止)
修改三:离心的时候我是在25摄氏度下离心(试剂盒上没说温度)

请各位老师、师兄师姐们赐教!
谢谢!
4楼2008-05-30 14:02:13
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