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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 重组质粒的连接转化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yinyue331

[交流] 求助 重组质粒的连接转化

将大小为4kb的Ac片段与去除了gus片段的Pbi121（大小为14758bp）载体相连接，使用的是MBI的连接酶，22度连接过夜，之后采用的是热激法转化到DH5感受态细胞中，涂板培养后只有一两个菌落出来，提取质粒后条带大小也只为15kb左右，酶切后的电泳图却任何条带都没有，到底是哪里出现了问题？请各位帮帮忙？
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1楼 2008-05-30 10:00:33
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jiwu20

铜虫 (小有名气)
将大小为4kb的Ac片段与去除了gus片段的Pbi121（大小为14758bp）载体相连接，使用的是MBI的连接酶，22度连接过夜，之后采用的是热激法转化到DH5感受态细胞中，涂板培养后只有一两个菌落出来，提取质粒后条带大小也只为15kb左右，酶切后的电泳图却任何条带都没有，

可能混有DNA酶，建议：用的试剂更换。
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9楼2008-06-05 09:43:44
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weiwei1

木虫 (小有名气)
酶切使用的质粒量有点少,重新切一下试试吧
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2楼2008-05-30 13:29:58
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nmnqwy

银虫 (正式写手)
可以与我联系：nmnqwy@163.com,QQ:309461653
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3楼2008-05-30 15:29:28
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
连接的温度用16度最好吧；
你得到的转化子是载体自连；
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4楼2008-05-30 19:25:49
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