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yinyue331

[交流] 求助 重组质粒的连接转化

将大小为4kb的Ac片段与去除了gus片段的Pbi121(大小为14758bp)载体相连接,使用的是MBI的连接酶,22度连接过夜,之后采用的是热激法转化到DH5感受态细胞中,涂板培养后只有一两个菌落出来,提取质粒后条带大小也只为15kb左右,酶切后的电泳图却任何条带都没有,到底是哪里出现了问题?请各位帮帮忙?
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jiwu20

铜虫 (小有名气)

将大小为4kb的Ac片段与去除了gus片段的Pbi121(大小为14758bp)载体相连接,使用的是MBI的连接酶,22度连接过夜,之后采用的是热激法转化到DH5感受态细胞中,涂板培养后只有一两个菌落出来,提取质粒后条带大小也只为15kb左右,酶切后的电泳图却任何条带都没有,

可能混有DNA酶,建议:用的试剂更换。
9楼2008-06-05 09:43:44
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weiwei1

木虫 (小有名气)

酶切使用的质粒量有点少,重新切一下试试吧
2楼2008-05-30 13:29:58
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nmnqwy

银虫 (正式写手)

可以与我联系:nmnqwy@163.com,QQ:309461653
3楼2008-05-30 15:29:28
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

连接的温度用16度最好吧;
你得到的转化子是载体自连;
4楼2008-05-30 19:25:49
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