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路尽繁华

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆中,每次做到阳筛时就做不出来,求解? 已有5人参与

将目的基因、双酶切载体,重组转入感受态,经培养长出几个菌落,然后进行阳筛,采取相应的pcr体系,总是跑不出结果,得到的只有引物二聚体,求各位大神指教啊!
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gaohy555

禁虫 (小有名气)

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12楼2014-12-31 09:52:24
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mumu624

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-30 12:07:24
路尽繁华: 金币+2, 有帮助 2014-12-30 17:22:07
双酶切一般来说还是比较容易成功的,片段和载体酶切后最好采用胶回收,根据二者的大小选择合适的比例进行连接,如果这样还不行的话就换个连接酶试试看。
2楼2014-12-30 09:39:04
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路尽繁华

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mumu624 at 2014-12-30 09:39:04
双酶切一般来说还是比较容易成功的,片段和载体酶切后最好采用胶回收,根据二者的大小选择合适的比例进行连接,如果这样还不行的话就换个连接酶试试看。

那平板长出的菌落,是没连接成功么?麻烦分析一下下啊
3楼2014-12-30 13:35:00
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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路尽繁华: 金币+1 2014-12-30 17:22:18
长的菌落太少了,你重新做一下。
4楼2014-12-30 13:39:48
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