24小时热门版块排行榜    

查看: 1573  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

路尽繁华

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆中,每次做到阳筛时就做不出来,求解? 已有5人参与

将目的基因、双酶切载体,重组转入感受态,经培养长出几个菌落,然后进行阳筛,采取相应的pcr体系,总是跑不出结果,得到的只有引物二聚体,求各位大神指教啊!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

昺昺

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 路尽繁华 at 2014-12-30 17:17:45
感受态买的活力应该可以,载体与目的片段比例=1:3,目的片段近2kb...

你的片段不短啊,难度肯定是有的,载体和片段回收的浓度有多少啊?我建议比例调整为1:5
太阳出来,星星要走。
11楼2014-12-31 07:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

mumu624

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-30 12:07:24
路尽繁华: 金币+2, 有帮助 2014-12-30 17:22:07
双酶切一般来说还是比较容易成功的,片段和载体酶切后最好采用胶回收,根据二者的大小选择合适的比例进行连接,如果这样还不行的话就换个连接酶试试看。
2楼2014-12-30 09:39:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路尽繁华

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mumu624 at 2014-12-30 09:39:04
双酶切一般来说还是比较容易成功的,片段和载体酶切后最好采用胶回收,根据二者的大小选择合适的比例进行连接,如果这样还不行的话就换个连接酶试试看。

那平板长出的菌落,是没连接成功么?麻烦分析一下下啊
3楼2014-12-30 13:35:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
路尽繁华: 金币+1 2014-12-30 17:22:18
长的菌落太少了,你重新做一下。
4楼2014-12-30 13:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见