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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条带淡，怎样优化？（如图）
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-12 17:29:49
加大模板量，换更好的反应buffer.摸索更好的退火温度。话说你引物加这么多？二聚体好亮，一般情况下我25体系加0.3。

那还得看你配的引物的浓度吧。。。。
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21楼2015-01-13 16:50:58
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:07:27
还是pfu的问题，普通PCR不建议使用，可能会使模板引物降解或者使扩增出来的新模板链降解，如果担心普通的Taq酶扩增不出结果的话，可以使用热启动Taq酶 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
热启动Taq酶 特异性灵敏度均高于普通的Taq酶
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
22楼2015-01-13 17:09:49
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molizerd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-01-13 16:50:58
那还得看你配的引物的浓度吧。。。。...

嗯。我一般就按华大或者生工给的单子上的那个稀释。。但是不管神马浓度。。楼主的图二聚体都这么亮。。不太合适啊。。

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23楼2015-01-13 17:36:58
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-13 17:36:58
嗯。我一般就按华大或者生工给的单子上的那个稀释。。但是不管神马浓度。。楼主的图二聚体都这么亮。。不太合适啊。。
...

那也有可能他把引物浓度加的高了，或者cDNA含量低了，剩下的引物没有与底物结合全成二聚体了。。
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24楼2015-01-14 13:17:16
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molizerd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-01-14 13:17:16
那也有可能他把引物浓度加的高了，或者cDNA含量低了，剩下的引物没有与底物结合全成二聚体了。。...

嗯。。所以说加大模板量降低引物量啦。。不过有同学说点样孔很亮是因为模板多了。。这个就分不清啦。

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25楼2015-01-14 13:46:47
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