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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-12 17:29:49
加大模板量,换更好的反应buffer.摸索更好的退火温度。话说你引物加这么多?二聚体好亮,一般情况下我25体系加0.3。

那还得看你配的引物的浓度吧。。。。
21楼2015-01-13 16:50:58
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:07:27
还是pfu的问题,普通PCR不建议使用,可能会使模板引物降解或者使扩增出来的新模板链降解,如果担心普通的Taq酶扩增不出结果的话,可以使用热启动Taq酶 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
热启动Taq酶 特异性灵敏度均高于普通的Taq酶
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
22楼2015-01-13 17:09:49
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molizerd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-01-13 16:50:58
那还得看你配的引物的浓度吧。。。。...

嗯。我一般就按华大或者生工给的单子上的那个稀释。。但是不管神马浓度。。楼主的图二聚体都这么亮。。不太合适啊。。

[ 发自小木虫客户端 ]
23楼2015-01-13 17:36:58
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

引用回帖:
23楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-13 17:36:58
嗯。我一般就按华大或者生工给的单子上的那个稀释。。但是不管神马浓度。。楼主的图二聚体都这么亮。。不太合适啊。。
...

那也有可能他把引物浓度加的高了,或者cDNA含量低了,剩下的引物没有与底物结合全成二聚体了。。
24楼2015-01-14 13:17:16
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molizerd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
24楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-01-14 13:17:16
那也有可能他把引物浓度加的高了,或者cDNA含量低了,剩下的引物没有与底物结合全成二聚体了。。...

嗯。。所以说加大模板量降低引物量啦。。不过有同学说点样孔很亮是因为模板多了。。这个就分不清啦。

[ 发自小木虫客户端 ]
25楼2015-01-14 13:46:47
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