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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于菌液PCR的问题
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superarm

金虫 (正式写手)

[交流] 关于菌液PCR的问题

最近左TA克隆，大概有3-4kb的片断，菌液PCR结果在3kb多处有两条带，挨着比较近，条带不浓。不知道是不是假阳性，载体大小为3000bp。用通用引物T7和SP6扩增，会不会引物自自己扩增空载体的产物？

[ Last edited by superarm on 2008-5-27 at 20:59 ]
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1楼 2008-05-27 20:58:20
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):谢谢，分析合理
可以，你说的这种情况会发生！
      在外源和载体差不多大时，PCR扩增就比较难判断了。建议用载体和外源连接后形成的序列中只有一酶切位点的酶切个连接后的载体，也就是这个位点要么在载体上，要么在外源上，只有一个位点，切个形成的线状DNA电泳检测，大小符合就可以了!
     就算外源不知道的情况下，选用多酶切位点的进行单酶切也可以！
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2楼2008-05-27 23:18:13
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superarm

金虫 (正式写手)
那有两条带，应该有一个是特异性扩增吧？以此是不是能判断片断连入了呢？做酶切有点麻烦，而且成本太高。
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3楼2008-05-28 00:07:32
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zhouyj

木虫 (正式写手)
可以将有两条带的提质粒酶切验证一下
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有朋友们的支持，在学术道路上才不会寂寞
4楼2008-05-28 09:00:51
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rinp

木虫 (正式写手)
最简单的办法就是去测下序了，哈哈
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海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米，不拿不舒服，拿了不能吃！
5楼2008-05-28 10:24:43
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superarm

金虫 (正式写手)
测序费钱又费时啊，不过省事，送出去了，不行产物直接测序，但是不准确
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与分子生物学的同仁一起遨游科学的海洋！
6楼2008-05-28 23:03:37
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