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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR反应空白对照和阴性对照都P出条带了是怎么回事
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.产物拿去测个序，看看到底是不是和你的目的条带一样的
2.我们实验室是做载体的，都是基于GFP构建的，所以当初我做载体拷贝数的时候相当痛苦，GFP气溶胶到处都是，用水为模板都能P出很亮的条带，最后没办法了我就买商业态的水，其他的所有东西，包括枪头，离心管，移液枪等等，全部放在UV下照3个小时以上，这样才使得negative control里没有带
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11楼2014-12-27 21:37:50
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落叶拾忆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by konaz at 2014-12-27 06:54:06
p出的带可能不是真的带 送去做一下测序
有可能是primer自合的产物 之类 不是真正产物

但是我所有的条带和阳性对照都在一个位置上而且是100多bp的，您说的产物应该不会有这么大吧? 而且我昨天又重新做了一遍，在超净台，盒子，枪头换的都是新的......
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12楼2014-12-30 08:47:01
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落叶拾忆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mm的毛毛 at 2014-12-27 00:29:23
从结果情况看应该是污染，各个都有带，还都是目的条带，应该不是试剂盒问题，应该是人为污染，比如水什么的。具体情况不了解，没法细致诊断。最简单办法是全换新的试试

我昨天又重新做了一遍，在超净台，盒子，枪头换的都是新的结果还是一样，而且是两个人做的结果也是一样的。另外，我的这个盒子的反应体系是不用加水补齐的......
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13楼2014-12-30 08:49:53
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落叶拾忆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 未知时光 at 2014-12-26 16:58:45
我想说厂家的试剂盒一般是不会有问题的，而且你也说了你的模板不常见，所以很有可能是你的原因，但你的具体实验环境我也不了解，所以具体怎么污染的我也不好妄下结论。...

我也觉得厂家不会范这么低级的错误。但是我们（是两个人）昨天又重新做了一遍换了屋子在超净台上做的，盒子，枪头都是新，除了离心的时候就没开过超净台。有点想不明白了....
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14楼2014-12-30 08:54:14
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summer0922

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果你之前 p过这个产物，有可能是加样的枪污染了，跑胶上样的枪要和做PCR的枪分开。

[ 发自小木虫客户端 ]
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15楼2014-12-30 09:25:33
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gkc05236

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

应该是你的模板抽提时被阳性样本污染了。建议紫外，酒精等进行一次彻底消毒，并空一天再进行实验

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2014-12-30 09:35:31
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落叶拾忆

新虫 (初入文坛)
请问各位老师引物非特异性扩增的片段一般是多大？100bp的条带能是非特异性产物吗？
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17楼2014-12-30 17:24:37
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大鼠05

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你说的情况可以确定有污染，引物2聚体长度可以推断。
下面可以作2个实验：
用这个盒子，枪头，新加样器，在超净台，作一遍；
用其他盒子，枪头，这套加样器，在超净台，作一遍；
根据结果，多半可以推测那里污染了
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18楼2014-12-30 18:46:51
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lxf921227

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

兄弟 你这个问题是怎么解决的  我也碰到了这个问题 无模板对照跑出目的大小的条带（引物新合成，水新拆封 takara，mix 新拆 康为的，枪头带滤芯 无菌无酶的，所有操作都在超净工作台进行） 不胜感激
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19楼2017-05-19 18:13:18
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许彦

木虫 (正式写手)
一般非特异性的就是100bp左右

发自小木虫IOS客户端
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20楼2017-05-21 14:58:39
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