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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR反应空白对照和阴性对照都P出条带了是怎么回事
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落叶拾忆

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR反应空白对照和阴性对照都P出条带了是怎么回事 已有10人参与

劳驾各位老师：
       我买的RT-PCR是两个盒子一个是提RNA的盒子，一个是RT-PCR反应的盒子。这个RT-PCR反应的盒子将反转录反应和PCR反应合为一步，具体操作就需要加盒子里的反应液（具体怎么配置的没说）、酶和模板就OK了，也就说正个反转录反应PCR反应的加样工作就完成了。我的问题是，开始按照说明书的步骤做：提RNA后进行RT-PCR反应跑胶结果空白对照、阴性对照、阳性对照及所有样品都有目的条带，只是阳性对照条带更亮、更粗，值得一提的是空白对照、阴性对照以及样品的条带亮度、粗细都差不多。后来为了排除提RNA过程的操作问题我没提RNA直接在RT-PCR反应液里分别加无酶水、阴性和阳性对照，结果还是都跑出了目的条带而且条带亮度、粗细基本一致。请问各位老师是厂家的RT-PCR反应的盒子有问题，还是别的其他什么原因？感谢各位，圣诞快乐！！！
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1楼 2014-12-25 16:20:59
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gkc05236

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

应该是你的模板抽提时被阳性样本污染了。建议紫外，酒精等进行一次彻底消毒，并空一天再进行实验

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2014-12-30 09:35:31
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puresnowlqin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-26 16:46:16
根据你说的情况应该是PCR体系污染。很可能是试剂、水、枪头、空气等的污染。你应该一个个排除。
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最喜欢的就是最好的。
2楼2014-12-25 16:53:05
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落叶拾忆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by puresnowlqin at 2014-12-25 16:53:05
根据你说的情况应该是PCR体系污染。很可能是试剂、水、枪头、空气等的污染。你应该一个个排除。

您好！我的枪头和水都是无酶的也是新的盒子也是新拿的而且我们是两个人同时拿的两个新的盒子！难道说是空气污染？气溶胶？怎么污染？请您详解
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3楼2014-12-25 17:26:24
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未知时光

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-26 16:46:26
有可能RT-PCR试剂盒被污染了
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我想起那天夕阳下的奔跑,那是我逝去的青春。
5楼2014-12-26 10:34:35
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