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恒河夕阳梦

铁虫 (小有名气)

[交流] 考马斯亮蓝法检测出蛋白质含量很低,而用凯氏定氮法测出总氮很高

最近在检测玉米浸泡水中的蛋白质含量,发现用考马斯亮蓝法测出的蛋白质含量很低,在1g/L以下,而用凯氏定氮法测出含量在100g/L以上。是否说明其中大部分都是小分子的多肽和氨基酸,大分子蛋白含量很少?考马斯亮蓝法的局限是否在这里?对于小肽无法检测?
这时候是否可以用三氯乙酸处理后取上清直接用茚三酮的方法测氨基酸含量,然后用凯氏定氮法测总氮量(即小肽和氨基酸的总量),两者的差值极为小肽含量?
但是问题采用茚三酮的方法时候,是否小肽也会和茚三酮反应,从而影响导致测的氨基酸含量不准?
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恒河夕阳梦

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zj风之子 at 2014-12-23 13:31:11
醇溶蛋白不溶于水。。可溶于50%~90%的乙醇溶液,你测量到的蛋白质是玉米中能够溶于水的那部分可溶性蛋白。资料很多,书籍、文献都有,具体的你可以到网上搜一下关于蛋白质方面的资料。...

考马斯亮蓝测的应该是能够溶于水的可溶性蛋白。凯氏定氮法测定的是所有含有氨基的物质。由于这个溶液我已经用0.22um孔径的滤膜处理,所以应该是没有大的不溶物了。于是凯氏定氮法测定出来的物质我猜测是不是氨基酸和多肽,而这些不和考马斯亮蓝反应?
11楼2014-12-25 15:57:42
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99503102

版主 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
恒河夕阳梦: 金币+1 2014-12-17 15:55:01
不能说考马斯亮蓝法不能测小肽,两者的差异我觉得是在于凯氏定氮测的是氮元素,其中就包括非蛋白的含氮物质,是一个较为粗略的结果,其值肯定要大于只能测定可溶性蛋白的考马斯亮蓝法测得值。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
微信公众号:食安小屋
2楼2014-12-17 15:03:59
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恒河夕阳梦

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 99503102 at 2014-12-17 15:03:59
不能说考马斯亮蓝法不能测小肽,两者的差异我觉得是在于凯氏定氮测的是氮元素,其中就包括非蛋白的含氮物质,是一个较为粗略的结果,其值肯定要大于只能测定可溶性蛋白的考马斯亮蓝法测得值。
...

这个我也清楚。首先其中的无机氮也是很少的,总氮太高。浸泡水其中非蛋白氮应该也不多。所以我在想是不是其中大部分是小肽或者氨基酸?不然考马斯亮蓝法检测出蛋白质含量这么少?
3楼2014-12-17 15:56:41
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qiuyuewne827

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
恒河夕阳梦: 金币+1 2014-12-20 12:20:14
考马斯亮蓝不适合测量小分子肽,通常为具有生物活性的,凯氏测定的是总氮量,包括非蛋白质氮,通过换算,计算出蛋白质,后者肯定比前者大啦!
4楼2014-12-17 17:04:24
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