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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shgd103

[交流] IPTG诱导产酶

木聚糖酶在大肠杆菌BL21中通过IPTG诱导表达，最好采用什么温度，和什么转速？诱导时间？请虫友帮忙！！！！谢谢！！！
[search]诱导[/search]
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1楼 2008-05-23 15:09:53
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+4,VIP+0):呵呵，不错，既有理论也有自己的经验，值得鼓励。谢谢
通常为了保证表达出来的蛋白具有活性而不是以包涵体的状态出现都采用低温长时间进行诱导表达，温度高则表达的量大切快，然而容易出现大量的包涵体，如果降低温度则会增加有活性的蛋白的产量。具体情况需要具体分析，没有做过这个实验的人也不会了解具体的情况。建议做一系列表达实验进行比较分析，选出最合适的方法。

一般超声破碎细菌后，高速离心，上清中表达的蛋白基本是有活性的，而沉淀中蛋白则是包涵体通常活性很低。这一点可以通过SDS-PAGE观察。
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金币是赌出来的
2楼2008-05-23 15:19:59
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shgd103

那温度最低大概到多少度？？？时间呢？？？
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3楼2008-05-24 23:21:34
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张力民

铜虫 (小有名气)
温度26度，时间一般10到12小时
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4楼2008-05-25 19:52:05
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
我曾经低到18度，结果还是表达了大量的目的蛋白，活性也还不错，可以诱导200ml，隔一段时间取一次样，然后电泳分析，观察最适时间。
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金币是赌出来的
5楼2008-05-26 09:42:07
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