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至尊木虫 (职业作家)

Felix Baumgartner Space Jump

[求助] 组织样品是当场匀浆后冷冻保存,还是直接将整个组织冷冻,等到分析时再匀浆它呢? 已有6人参与

课题组目前在做代谢组学工作,得到了肝脏、脾脏等生物组织样品。我目前有两个处理方案匀浆样品:
1)直接将取出来的整个组织冷冻,等到分析时再匀浆它呢?需不需要适当剪碎呢?
2)生物组织样品被当场取出来,及时匀浆后,放入-20摄氏度冰箱 冷冻保存呢?
哪位朋友做个这方面的研究呢?十分期待指导。
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至尊木虫 (职业作家)

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2楼: Originally posted by wb982301933 at 2014-12-12 20:49:28
选择2方案比较合理

能否有适当说明呢
3楼2014-12-12 20:51:17
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4楼: Originally posted by zbgood2009 at 2014-12-13 07:42:15
用第二种吧,都是这么做的。

你能给个文献吗?我查到的文献基本上都没讲这个细节问题。
5楼2014-12-13 08:53:10
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7楼: Originally posted by 冰湖倩影 at 2014-12-14 19:17:30
怎么我们实验室是采用的方案1呢,我们课题组是做药物代谢的,测量组织里面的药物含量是用匀浆,都是先把组织取出来后,放置在-80度冰箱,分析的时候,融化加3倍体积生理盐水匀浆后在分析的。

这个小问题,很多人可能忽略
8楼2014-12-15 08:37:11
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9楼: Originally posted by all_ at 2014-12-16 15:51:20
我们做的时候都是组织先冷冻,放到-80摄氏度的冰箱,待分析时在处理

我觉得,你们这样的做法可能欠妥
10楼2014-12-16 16:43:08
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11楼: Originally posted by all_ at 2014-12-16 18:49:59
为什么?...

匀浆是为了使样品被粉碎、细胞破裂,使RNA彻底释放出来。一般讲来,细胞无须粉碎即可直接匀浆,组织需要破碎后才能匀浆。
酵母菌和细菌需要先用相应的酶破壁后才能匀浆。
内源酶含量较低且较容易匀浆的组织可以在裂解液中通过匀浆器一次完成破碎和匀浆过程;植物组织,肝脏,胸腺,胰腺,脾脏,脑,脂肪,肌肉组织等样品,要么内源酶含量低,要么难匀浆,所以必须将组织的粉碎和匀浆分开操作。最可靠而且得率最高的粉碎方法是使用液氮的碾磨,最可靠的匀浆方法是使用电动匀浆器。
13楼2014-12-16 21:49:52
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7楼: Originally posted by 冰湖倩影 at 2014-12-14 19:17:30
怎么我们实验室是采用的方案1呢,我们课题组是做药物代谢的,测量组织里面的药物含量是用匀浆,都是先把组织取出来后,放置在-80度冰箱,分析的时候,融化加3倍体积生理盐水匀浆后在分析的。

如果做代谢组学研究,这么处理可能就不合适了
14楼2014-12-16 21:52:22
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16楼: Originally posted by cczl at 2015-01-06 19:15:39
我们实验室药动的,做的时候都是用第一种方法,没有剪碎,用的时候再剪

哦。剪碎要好些吧?
17楼2015-01-06 20:30:34
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11楼: Originally posted by all_ at 2014-12-16 18:49:59
为什么?...

先冻,是比较方便。但要考虑组织中酶的影响,化合物自身稳定性。
先前处理,再冻存,可能更能体现化合物自身性质稳定性。
21楼2017-07-26 10:16:53
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