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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 关于DNA ladder检测试剂盒 求助
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cuijing0529

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于DNA ladder检测试剂盒 求助 已有1人参与

我正在做水稻悬浮细胞细胞凋亡检测，之前用手提总是提不出来，想买碧云天的dna ladder抽提试剂盒，但说明书上写的是做动物细胞的，有没有人用这个试剂盒提过植物细胞ladder？水稻的更好，效果怎么样啊？非常感谢！！
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1楼 2014-12-11 20:50:16
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cuijing0529

新虫 (初入文坛)
自己顶
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2楼2014-12-12 09:10:24
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lanhongxia

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cuijing0529(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-12-12 20:22:51
碧云天的细胞凋亡-DNA  ladder抽提试剂盒有两款，有一个是写的提取动物细胞的，另一个是可以提取植物细胞的，这个是他的说明书
使用说明：
1.样品收集
  a)对于组织样品：
    切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。或直接冰浴上匀浆。
  b)对于贴壁细胞：
    胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
  c)对于悬浮细胞：
    1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
2.DNA ladder抽提
  a)每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。
  b)对于上述收集好的样品，每5毫克组织或者106个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解液，
    Vortex混匀，充分裂解组织或细胞。
  c)50℃水浴消化过夜(通常12-20小时皆可)。
  d)加入500微升Tris平衡苯酚。
  e)Vortex剧烈混匀，使有机相和水相充分混合，以达到抽提效果。4℃，12,000g离心5分钟。
  f)缓慢吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提
    一次(同步骤e)。
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3楼2014-12-12 11:44:05
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