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进哥哥lee

新虫 (初入文坛)

[交流] 枯草芽孢杆菌RNA提取受阻,求大神帮忙,真心没法了已有5人参与

小弟做的是枯草芽孢杆菌的小RNA表达, 第一步就遇到拦路虎,提RNA提了好久好久都没有成功,老板大发雷霆了。最初我用的是trizol提取,没有成功,然后用试剂盒,还是不行,我不知道问题出在哪儿,请师兄师姐帮着提取,还是不行,听他们说提RNA很容易的,为什么到了我这儿就这么难呢??枪头都是用的进口的,无RNA酶的,革兰氏阳性菌真的这么难提取RNA吗,有做的同学老师,求你们支招,感激不尽!
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开小猫

木虫 (正式写手)

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dllchina: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-15 21:59:09
我也是提芽孢杆菌的,能看到条带,可是总是有降解,做反转录还行,测序就不行了……同求大神支招啊……
2楼2014-12-11 17:44:58
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dongguolang

新虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
dllchina: 金币+1 2014-12-15 21:59:28
试剂盒才是正解,可能是融菌那一步不好做,阳性菌细胞壁厚
3楼2014-12-12 09:43:50
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lixiaoyi1981

荣誉版主 (正式写手)


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这个我以前好像遇到过,刚开始提不出来,后来加了点溶菌酶就ok了
4楼2014-12-13 13:28:18
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)



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溶菌酶很关键,另外酶解后可以用液氮磨一下

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-12-13 13:33:03
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eagles123

金虫 (正式写手)


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秘诀就是RNAlater, RNase Zap,和裂解, 最好是超声和溶菌酶一起用
6楼2014-12-13 14:26:56
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