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hongchenlyan

金虫 (小有名气)

[交流] 转基因拟南芥T0代种子筛选???

T0代种子在附加抗生素的平板上筛选时,都能发芽变绿,只是生长速度慢。无语中.....
但是一般Protocal上都是写:转成功的会变绿,而不成功的种子则发黄,不能生长。
请做过筛选有经验的兄弟姐妹们指教!非常感谢!
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jerome711

银虫 (小有名气)

兄台是不是用的浓度不合适?我做过拟南芥抗生素筛选,没有抗性的的确是发黄不生长。改变抗生素浓度试试。
做懂得生活的人
2楼2008-05-20 09:16:01
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hongchenlyan

金虫 (小有名气)

谢谢!我用的卡那浓度是参照一般Protocal的,50ug/ml, 需要浓度更大一些吗?
3楼2008-05-20 10:35:05
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jerome711

银虫 (小有名气)

我用的也是这个浓度,你可以再找点别的非抗种试试。配制培养基时注意家抗生素的条件。培养基不要太热了,可以放在50度烘箱保温,温度恒定了再加抗生素。另外抗生素质量应该没问题吧?
做懂得生活的人
4楼2008-05-20 10:55:30
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hongchenlyan

金虫 (小有名气)

谢谢!
正准备重新配置抗生素。
另,问一下一般在培养基中生长几天后就可以移到土壤基质中?
5楼2008-05-21 10:52:20
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wency

待两片子叶完全展开就可以移植了.
6楼2008-05-22 00:10:42
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wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种

要看你用的是什么抗生素.不同的抗生素的筛选结果不同.
卡那霉素是使未转基因的幼苗变黄.
潮霉素筛选只有生长速度的差异.
其它的抗生素效果也不同.
7楼2008-05-22 09:15:57
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hongchenlyan

金虫 (小有名气)

谢谢!
用的pBI121载体,是卡那霉素。
其生长过程是否也就是种子能发芽,只是幼苗慢慢会变黄?
8楼2008-05-22 10:54:41
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