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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】质粒转染后细胞数目明显减少?
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linxianfan

[交流] 【求助】质粒转染后细胞数目明显减少?

用脂质体转染质粒入树突状细胞，结果转染后48小时，细胞数量明显减少，用台盼兰技术发现剩余的细胞也有近一半死亡，但用RT－PCR仍能扩增出目的基因，这是不是说明还是有成功转染进去的呢？细胞大量死亡可能是什么原因呢？请各位指教？谢谢！
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1楼 2008-05-19 13:09:00
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张力民

铜虫 (小有名气)
脂质体对细胞是有毒性的，你能不能把你的实验流程简单说一下，大家也好帮忙分析啊
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2楼2008-05-19 14:05:31
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linxianfan

好的！我是在细胞培养第7天的时候进行转染的，在6孔板中进行，大约4ug质粒和10uL脂质体各加入250uL1640中，5分钟后两者混合，孵育半小时，加入吸去上清的细胞中，无血清无抗生素培养基共2mL，培养6h后弃上清，加入含血清、抗生素及细胞因子的培养基3mL。总共培养48h后做RT。结果发现细胞明显减少了！（脂质体是invitrogen的脂质体2000，操作也是按说明书进行的）
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3楼2008-05-19 15:23:25
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linxianfan

还有我的质粒是用普通的质粒提取试剂盒提取的
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4楼2008-05-19 15:26:01
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