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linxianfan

[交流] 【求助】质粒转染后细胞数目明显减少?

用脂质体转染质粒入树突状细胞,结果转染后48小时,细胞数量明显减少,用台盼兰技术发现剩余的细胞也有近一半死亡,但用RT-PCR仍能扩增出目的基因,这是不是说明还是有成功转染进去的呢?细胞大量死亡可能是什么原因呢?请各位指教?谢谢!
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张力民

铜虫 (小有名气)

脂质体对细胞是有毒性的,你能不能把你的实验流程简单说一下,大家也好帮忙分析啊
2楼2008-05-19 14:05:31
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linxianfan

好的!我是在细胞培养第7天的时候进行转染的,在6孔板中进行,大约4ug质粒和10uL脂质体各加入250uL1640中,5分钟后两者混合,孵育半小时,加入吸去上清的细胞中,无血清无抗生素培养基共2mL,培养6h后弃上清,加入含血清、抗生素及细胞因子的培养基3mL。总共培养48h后做RT。结果发现细胞明显减少了!(脂质体是invitrogen的脂质体2000,操作也是按说明书进行的)
3楼2008-05-19 15:23:25
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linxianfan

还有我的质粒是用普通的质粒提取试剂盒提取的
4楼2008-05-19 15:26:01
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