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347710974

新虫 (初入文坛)

[求助] 融合PCR 已有2人参与

融合PCR第一次融合成功了,把融合的片段回收后作为模板,再次进行pcr,结果却扩增不出来,求大神指点迷津!这是为什么呢???
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不太清楚,但建议融合后跑胶条带合适的话,直接以PCR产物为模板,上下游引物扩增,增加产物浓度后再纯化
你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2014-11-25 09:04:36
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你融合的片段是不是在回收的过程中出现断裂了?
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
3楼2014-11-25 12:37:34
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347710974

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biotech_zhou at 2014-11-25 12:37:34
你融合的片段是不是在回收的过程中出现断裂了?

不知道哎。。。应该不能有这种情况吧,片段大小也就2500bp,也不是很长。。。。。。。
4楼2014-11-25 13:38:04
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炼水燎原

新虫 (小有名气)

检查引物,降低退火试试
trust is earned
5楼2014-11-26 19:33:07
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347710974

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2014-11-25 09:04:36
不太清楚,但建议融合后跑胶条带合适的话,直接以PCR产物为模板,上下游引物扩增,增加产物浓度后再纯化

此招试过了,可是P出来的条带还不如第一次融合的条带亮,不知道什么情况?
6楼2014-11-27 13:21:58
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