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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物设计
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utryer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by xlx906047684 at 2014-11-25 21:33:38
这么简单吗，能不能说的具体点啊，我之前学的化学，现在才开始做分子，好多还不太懂，谢谢帮忙啊...

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/
1.在引物处输入你的正向引物和反向引物，
2.Database选择你要查询的数据库
3.Organism你的物种，
然后查询，
理论上来说，结果会出了n条。看看里面有没有你所要的片断长度及实际扩出来的长度。
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11楼2014-11-26 01:03:45
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:06:23
哪有想的那么麻烦，这个原则，那个原则
http://www.simgene.com/Primer3
用了很多次，从排名前5的里边选靠前的，基本没问题
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环境卫生、微生物学、卫生应急
12楼2014-11-26 09:36:49
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977673882

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我感觉PCR产物的大小有多大没关系，只要这对引物把目的条带P出来就行，你们觉得呢？
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创造多彩的人生
13楼2014-11-26 10:45:00
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gufeng2008

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:06:32
Left primer is Tm too low/High end self complementarity; Right primer is Tm too low。下面引物试试看行不行：
LEFT   aaacccattcgatcgatcattagta
RIGHT  tgtggaggaaactcacaattattca
PRODUCT SIZE: 1367.
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14楼2014-11-26 10:49:28
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xlx906047684: 金币+44, ★有帮助 2014-11-26 12:16:13
你扩增的基因来源和文献上一样吗？
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···
15楼2014-11-26 11:02:08
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xlx906047684

金虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 小冀- at 2014-11-26 11:02:08
你扩增的基因来源和文献上一样吗？

和文献上是同一种植物，但不确定种属是否一样
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16楼2014-11-26 12:16:08
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xlx906047684

金虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by gufeng2008 at 2014-11-26 10:49:28
Left primer is Tm too low/High end self complementarity; Right primer is Tm too low。下面引物试试看行不行：
LEFT   aaacccattcgatcgatcattagta
RIGHT  tgtggaggaaactcacaattattca
PRODUCT SIZE: 1367.

不是说3端最好不是A吗（不好意思金币发完了，只能赞一下了，谢谢啊）
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17楼2014-11-26 12:31:42
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站着别动君

新虫 (小有名气)
pcr程序设计的对么？比如退火时间？。。

[ 发自小木虫客户端 ]
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18楼2014-11-26 13:55:10
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gufeng2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by xlx906047684 at 2014-11-26 12:31:42
不是说3端最好不是A吗（不好意思金币发完了，只能赞一下了，谢谢啊）...

有这原则，但主要看引物和多聚酶的亲和力，你的序列GC含量高，所以PCR条件要选用高GC的。
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19楼2014-11-26 14:18:01
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xlx906047684

金虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 站着别动君 at 2014-11-26 13:55:10
pcr程序设计的对么？比如退火时间？。。

退火温度和时间都调整过，还是结果都差不多
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20楼2014-11-26 15:10:18
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