24小时热门版块排行榜    

查看: 1632  |  回复: 28

utryer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by xlx906047684 at 2014-11-25 21:33:38
这么简单吗,能不能说的具体点啊,我之前学的化学,现在才开始做分子,好多还不太懂,谢谢帮忙啊...

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/
1.在引物处输入你的正向引物和反向引物,
2.Database选择你要查询的数据库
3.Organism你的物种,
然后查询,
理论上来说,结果会出了n条。看看里面有没有你所要的片断长度及实际扩出来的长度。
11楼2014-11-26 01:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:06:23
哪有想的那么麻烦,这个原则,那个原则
http://www.simgene.com/Primer3
用了很多次,从排名前5的里边选靠前的,基本没问题
环境卫生、微生物学、卫生应急
12楼2014-11-26 09:36:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

977673882

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我感觉PCR产物的大小有多大没关系,只要这对引物把目的条带P出来就行,你们觉得呢?
创造多彩的人生
13楼2014-11-26 10:45:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gufeng2008

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:06:32
Left primer is Tm too low/High end self complementarity; Right primer is Tm too low。下面引物试试看行不行:
LEFT   aaacccattcgatcgatcattagta
RIGHT  tgtggaggaaactcacaattattca
PRODUCT SIZE: 1367.
14楼2014-11-26 10:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xlx906047684: 金币+44, 有帮助 2014-11-26 12:16:13
你扩增的基因来源和文献上一样吗?
···
15楼2014-11-26 11:02:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xlx906047684

金虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 小冀- at 2014-11-26 11:02:08
你扩增的基因来源和文献上一样吗?

和文献上是同一种植物,但不确定种属是否一样
16楼2014-11-26 12:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xlx906047684

金虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by gufeng2008 at 2014-11-26 10:49:28
Left primer is Tm too low/High end self complementarity; Right primer is Tm too low。下面引物试试看行不行:
LEFT   aaacccattcgatcgatcattagta
RIGHT  tgtggaggaaactcacaattattca
PRODUCT SIZE: 1367.

不是说3端最好不是A吗(不好意思金币发完了,只能赞一下了,谢谢啊)
17楼2014-11-26 12:31:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

站着别动君

新虫 (小有名气)

pcr程序设计的对么?比如退火时间?。。

[ 发自小木虫客户端 ]
18楼2014-11-26 13:55:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gufeng2008

金虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by xlx906047684 at 2014-11-26 12:31:42
不是说3端最好不是A吗(不好意思金币发完了,只能赞一下了,谢谢啊)...

有这原则,但主要看引物和多聚酶的亲和力,你的序列GC含量高,所以PCR条件要选用高GC的。
19楼2014-11-26 14:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xlx906047684

金虫 (著名写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 站着别动君 at 2014-11-26 13:55:10
pcr程序设计的对么?比如退火时间?。。

退火温度和时间都调整过,还是结果都差不多
20楼2014-11-26 15:10:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xlx906047684 的主题更新
信息提示
请填处理意见