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qiuzhen8809

新虫 (小有名气)

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[求助] 悬浮结团细胞转染

有没有做过悬浮细胞的转染，有什么注意事项吗？

小妹要做一株悬浮细胞的转染，用脂质体转染，之前没做过，小白一个。
有些不太懂的地方，望各路大神不吝赐教：

1. 在孔板转染过程中，应该如何换液？需要孔板离心还是直接吸取上清？大概去除多少培养液？
直接吸取的话会不会同时吸走一部分细胞？
2. 细胞容易结团，在转染过程中需要经常吹打吗？
3. 两步筛选是怎么做的？从24孔板中用有限稀释法挑到96孔板中，然后继续加抗性筛选再挑到96孔板中吗？
4. 关于有限稀释法，在24孔板中转染后经过筛选后，怎么根据细胞数进行稀释？要每个孔数细胞吗？
5. 摇瓶液体培养应该在哪一步开始进行？