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劳龙宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by SundayMilk at 2014-11-19 15:57:15
extaq有校正的功能。稍长的片段,会一直校对,切切切,扩不出来。
...

你的意思是换个酶试试?
21楼2014-11-19 19:05:03
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劳龙宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by happydove at 2014-11-19 17:30:31
1是用内参做个对照
2是用普通的酶就可以
3是如果是表达量比较低 模板量多加  先不稀释试一下
4退火温度50度先扩一下看看吧

在扩基因前我就做了内参的PCR,都有!
普通酶会不会有碱基错配啊?
今天下午做了个温度梯度,,我换了模板,估计很有可能是模板的问题,目的条带出现了,但是不亮,引物二聚体还是有!
谢谢你!祝笑口常开!
22楼2014-11-19 19:09:40
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劳龙宝

新虫 (小有名气)

我的问题出现了转机!就是我换了模板!之前分装没有用的模板!750bp出现了带,只是杂带也有,下一步就是优化条件!建议大家以后反转的cDNA最后分装使用!
23楼2014-11-20 08:31:55
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董博士

金虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 劳龙宝 at 2014-11-19 15:56:46
今天确实是换了之前分装的cDNA(反转后没有用过的),做个温度梯度就出现了目的条带!但是带比较淡!现在就是如何使目的条带亮点!谢谢!...

一直扩增不出来,一个是条件不对,一个就是表达少,如果是表达少,那么有一个办法,你既然扩增出了目的片段,就可以以此扩增产物当模板,进行再次扩增,我之前就是这么做了,效果不错,祝实验顺利!
医学&统计学
24楼2014-11-20 11:15:05
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劳龙宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
24楼: Originally posted by 董博士 at 2014-11-20 11:15:05
一直扩增不出来,一个是条件不对,一个就是表达少,如果是表达少,那么有一个办法,你既然扩增出了目的片段,就可以以此扩增产物当模板,进行再次扩增,我之前就是这么做了,效果不错,祝实验顺利!...

恩,谢谢!
25楼2014-11-20 11:23:07
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