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小谢gogogo

金虫 (小有名气)

[求助] MTT之殇?! 已有1人参与

本人最近在做MTT,筛选药物的敏感株。阳性药高浓度是10ug/ml,三倍梯度稀释;样品高浓度是1000ug/ml,三倍梯度稀释,五个复孔。现在也做了五种细胞株,没株也重复了两次,但是怎么做也不能达到一下标准:①阳性药能做出浓度依赖,样品组浓度依赖性几乎没有,参差不齐,药物效果是有的,抑制率也有百分之六七十,但为何做不出浓度依赖呢?②570nm测吸光度,阴性对照无法达到0.7-1.2之间,我也才铺了3000个细胞啊?但换成490nm就符合标准了,不知道这两个吸光度有何不同?③我现在用的是Gibco的血清,这其中血清会有影响吗?我的实验设计还需要怎么改善?⑤一般大神筛敏感株要用多少株细胞啊?要做到什么程度才可以呢?这种情况都一个月了,好心烦,希望各位帮我解答。。。每个问题10金币送上,谢谢。
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学习阶段,加油!
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erin0208

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

关键要看细胞密度,因为细胞大小有不同,不能只看细胞个数。关于血清的影响,有看到15%的血清会有影响,还有你的药物可能会与MTT发生反应影响实验结果,所以可以用PBS洗了细胞后再加MTT检测。关于490和570我也迷茫中,多交流!
2楼2014-11-28 17:08:42
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