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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 关于T载体的疑问

请问T载体连入片段是否有正向和逆向之分呢?

还有就是如果用T载体连接大于2KB的片段,是否很困难,有没有什么需要注意的地方呢?谢谢
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):详尽的回答,呵呵,谢谢
T-vector 是指在线性载体的末端有个T的尾巴,这个尾巴在双链中成镜像关系,一般不会发生环化。
目的片段在加上了A尾巴后,和T-vecotr上的T尾巴成互补的关系;在连接酶的作用下,目的片段和载体连接。
T-vector 是有正向和反向之分,但是在连接时都不会去考虑这个问题,连接T载体一般都是用来测序的。
大于2KB时,连接的效率是比1K时低些;一般,片段越长,连接的难度越大。
T载体是比较容易连接的载体,按照说明说来做,一般没有问题的!
可以延长连接时间,温度在16°,温度要稳定!
2楼2008-05-12 07:43:04
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Aill237

金虫 (小有名气)

16度么...我怎么以前似乎是37连的....
每天都要进步一点
3楼2008-05-12 10:02:53
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

请问延长连接时间到多长时间呢?我的片段大小为2kb和2。8kb
4楼2008-05-12 12:39:31
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匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
5楼2008-05-12 22:33:51
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

我这次连接载体取了0.25微升,片段取了4.5微升,不知道够不够量呢。16度连接了3个多小时然后放在了4度过夜,不知道结果怎样,希望成功。

谢谢楼上的回答。

甚么是Cracking 方法呢
6楼2008-05-13 17:10:06
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darkblue111

铜虫 (初入文坛)

16度过夜后再放四度冰箱吧
7楼2008-05-14 09:06:21
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

谢谢楼上的,按照你的方法已经成功了。
8楼2008-05-15 19:10:36
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