应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反转录后PCR扩不出目的条带
273/3返回列表上一页123
查看: 2976  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

MLN10000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我有一个建议，你用降落PCR。然后跑电泳没有的话 再对PCR产物PCR若还是没有 。我也没办法了
赞一下 回复此楼
21楼2014-11-17 11:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by MLN10000 at 2014-11-17 11:07:57
我有一个建议，你用降落PCR。然后跑电泳没有的话 再对PCR产物PCR若还是没有 。我也没办法了

恩恩，我试试
回复此楼
22楼2014-11-18 11:18:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-17 09:30:40
你逆转录的引物是什么啊，oligodT还是随机引物，如果你用的是随机引物进行逆转录的，你扩不出来很正常。

用的 random primer：oligodt 2:1。和其他人讨论了一下说RNA质量还不够好，260/280才1.9左右
赞一下 回复此楼
23楼2014-11-18 11:21:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 289363400 at 2014-11-17 09:38:02
不知道这个基因的表达水平如何呢，如果很低的话，不比管家基因的高水平表达，想P出来就有难度。如果有的话，你可以参考一下关于这个基因的其它文献嘛，或者不同种属的也可以。

恩，试了好几个细胞株，文献报道都表达挺多的，看这个基因的文献里几乎好多都是直接买的cDNA,没有自己提RNA逆转录扩
赞一下 回复此楼
24楼2014-11-18 11:22:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by wxk19960113 at 2014-11-17 01:32:19
内参能扩增出来，说明你的模板应该没问题，最有可能是你的引物设计有问题，重新设计引物试试吧。

恩恩，这也再换了试试
赞一下 回复此楼
25楼2014-11-18 11:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

百褶裙de夏天

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by 半岛铁盒lsf at 2014-11-18 11:21:13
用的 random primer：oligodt 2:1。和其他人讨论了一下说RNA质量还不够好，260/280才1.9左右...

那你的问题大多出在引物上面，不要用随机引物，随机引物逆转录出来的是一段一段的，你用oligodT进行逆转录吧，能拿到的cDNA要完整一点，然和再进行PCR。
赞一下 回复此楼
26楼2014-11-19 10:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-19 10:38:05
那你的问题大多出在引物上面，不要用随机引物，随机引物逆转录出来的是一段一段的，你用oligodT进行逆转录吧，能拿到的cDNA要完整一点，然和再进行PCR。...

我试试咯，谢谢
回复此楼
27楼2014-11-21 14:08:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 半岛铁盒lsf 的主题更新
273/3返回列表上一页123
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 7/350 2026-10-12 14:47 by chuans0923
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭