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MLN10000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我有一个建议,你用降落PCR。然后跑电泳没有的话 再对PCR产物PCR若还是没有 。我也没办法了
21楼2014-11-17 11:07:57
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)

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21楼: Originally posted by MLN10000 at 2014-11-17 11:07:57
我有一个建议,你用降落PCR。然后跑电泳没有的话 再对PCR产物PCR若还是没有 。我也没办法了

恩恩,我试试
22楼2014-11-18 11:18:23
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)

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19楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-17 09:30:40
你逆转录的引物是什么啊,oligodT还是随机引物,如果你用的是随机引物进行逆转录的,你扩不出来很正常。

用的 random primer:oligodt 2:1。和其他人讨论了一下说RNA质量还不够好,260/280才1.9左右
23楼2014-11-18 11:21:13
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)

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20楼: Originally posted by 289363400 at 2014-11-17 09:38:02
不知道这个基因的表达水平如何呢,如果很低的话,不比管家基因的高水平表达,想P出来就有难度。如果有的话,你可以参考一下关于这个基因的其它文献嘛,或者不同种属的也可以。

恩,试了好几个细胞株,文献报道都表达挺多的,看这个基因的文献里几乎好多都是直接买的cDNA,没有自己提RNA逆转录扩
24楼2014-11-18 11:22:36
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)

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18楼: Originally posted by wxk19960113 at 2014-11-17 01:32:19
内参能扩增出来,说明你的模板应该没问题,最有可能是你的引物设计有问题,重新设计引物试试吧。

恩恩,这也再换了试试
25楼2014-11-18 11:22:55
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百褶裙de夏天

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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23楼: Originally posted by 半岛铁盒lsf at 2014-11-18 11:21:13
用的 random primer:oligodt 2:1。和其他人讨论了一下说RNA质量还不够好,260/280才1.9左右...

那你的问题大多出在引物上面,不要用随机引物,随机引物逆转录出来的是一段一段的,你用oligodT进行逆转录吧,能拿到的cDNA要完整一点,然和再进行PCR。
26楼2014-11-19 10:38:05
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)

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26楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-19 10:38:05
那你的问题大多出在引物上面,不要用随机引物,随机引物逆转录出来的是一段一段的,你用oligodT进行逆转录吧,能拿到的cDNA要完整一点,然和再进行PCR。...

我试试咯,谢谢
27楼2014-11-21 14:08:16
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