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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反转录后PCR扩不出目的条带
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MLN10000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我有一个建议，你用降落PCR。然后跑电泳没有的话 再对PCR产物PCR若还是没有 。我也没办法了
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21楼2014-11-17 11:07:57
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
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21楼: Originally posted by MLN10000 at 2014-11-17 11:07:57
我有一个建议，你用降落PCR。然后跑电泳没有的话 再对PCR产物PCR若还是没有 。我也没办法了

恩恩，我试试
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22楼2014-11-18 11:18:23
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
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19楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-17 09:30:40
你逆转录的引物是什么啊，oligodT还是随机引物，如果你用的是随机引物进行逆转录的，你扩不出来很正常。

用的 random primer：oligodt 2:1。和其他人讨论了一下说RNA质量还不够好，260/280才1.9左右
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23楼2014-11-18 11:21:13
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
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20楼: Originally posted by 289363400 at 2014-11-17 09:38:02
不知道这个基因的表达水平如何呢，如果很低的话，不比管家基因的高水平表达，想P出来就有难度。如果有的话，你可以参考一下关于这个基因的其它文献嘛，或者不同种属的也可以。

恩，试了好几个细胞株，文献报道都表达挺多的，看这个基因的文献里几乎好多都是直接买的cDNA,没有自己提RNA逆转录扩
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24楼2014-11-18 11:22:36
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by wxk19960113 at 2014-11-17 01:32:19
内参能扩增出来，说明你的模板应该没问题，最有可能是你的引物设计有问题，重新设计引物试试吧。

恩恩，这也再换了试试
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25楼2014-11-18 11:22:55
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百褶裙de夏天

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by 半岛铁盒lsf at 2014-11-18 11:21:13
用的 random primer：oligodt 2:1。和其他人讨论了一下说RNA质量还不够好，260/280才1.9左右...

那你的问题大多出在引物上面，不要用随机引物，随机引物逆转录出来的是一段一段的，你用oligodT进行逆转录吧，能拿到的cDNA要完整一点，然和再进行PCR。
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26楼2014-11-19 10:38:05
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半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-19 10:38:05
那你的问题大多出在引物上面，不要用随机引物，随机引物逆转录出来的是一段一段的，你用oligodT进行逆转录吧，能拿到的cDNA要完整一点，然和再进行PCR。...

我试试咯，谢谢
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27楼2014-11-21 14:08:16
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