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lybio金虫 (正式写手)
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[交流]
请教平端连接的几个问题
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大家好！这周做了2次平端连接，一个菌落都没见其长，有若干问题想向有经验的朋友请教 1、载体和DNA片段的量。载体平端酶切回收，进行去磷酸化，以及目的基因酶切回收后平端补平，再次进行跑电泳（条带已很暗），凝胶纯化回收。请问怎么能定量知道DNA的浓度呢，分光光度计吗？那DNA的量不是稀释了很多倍，能测出吗？ 2、连接体系。连接体系一般是10ul吗？连接酶的量应该加多少ul呢，教科书说是粘性连接酶量的10倍，需要那么多吗，还是按照TAKARA说明书即可？连接的温度是16度还是22度？ 3、PEG。PEG8000的终浓度是15％吗？我查了一些资料，他们用PEG6000，终浓度也不一样。 谢谢指教！ |
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