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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lybio

金虫 (正式写手)

[交流] 请教平端连接的几个问题

大家好！这周做了2次平端连接，一个菌落都没见其长，有若干问题想向有经验的朋友请教
1、载体和DNA片段的量。载体平端酶切回收，进行去磷酸化，以及目的基因酶切回收后平端补平，再次进行跑电泳（条带已很暗），凝胶纯化回收。请问怎么能定量知道DNA的浓度呢，分光光度计吗？那DNA的量不是稀释了很多倍，能测出吗？
2、连接体系。连接体系一般是10ul吗？连接酶的量应该加多少ul呢，教科书说是粘性连接酶量的10倍，需要那么多吗，还是按照TAKARA说明书即可？连接的温度是16度还是22度？
3、PEG。PEG8000的终浓度是15％吗？我查了一些资料，他们用PEG6000，终浓度也不一样。
谢谢指教！
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1楼 2008-05-10 23:25:27
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黑罕

金虫 (小有名气)
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):呵呵，谢谢。很及时的回复。欢迎常来
1、载体和DNA片段的量。采用扫胶仪下,用软件定量
2  连接酶的量,我加到1ul     TAKARA   16度
3  PEG8000的终浓度是10％
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2楼2008-05-11 08:14:43
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