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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 怎样测蛋白质中的二硫键含量
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1012203014

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by m919 at 2014-11-11 09:45:01
我提取的时候，也是自己配溶液。 没有觉得有多么难配。...

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法
谢谢了
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奋斗！永不止步！
11楼2015-10-07 15:51:36
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爱而成交

金虫 (正式写手)
送红花一朵
x射线光能谱可测！

发自小木虫Android客户端
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任凭周糟如何，学习与拼博的初心不变。
12楼2015-10-11 12:30:04
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缪缪喵喵喵

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by m919 at 2014-11-10 20:02:26
有试剂盒的吧？ 而且测-SH不是一样的吗？

请问买什么试剂盒可以测二硫键和巯基？
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13楼2016-02-23 14:16:03
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小叶小花

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 散仙孔乙己 at 2014-11-11 09:59:42
贮藏期内我是用巯基变化来反应的，现在是表征我自己制备的抗冻剂（添加到鱼糜中）...

请问我现在也是做鱼糜，抗冻剂这块。测了活性巯基和总巯基。出现总巯基小于活性巯基的问题，请问你遇到过吗？二硫键的NTSB怎么配制啊？？打扰了
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14楼2017-04-03 09:44:43
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